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标题:[求助]检测细胞周期，为何样本会出现大量碎片

kulee[使用道具]
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发表于 2012-3-23 13:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]检测细胞周期，为何样本会出现大量碎片



各位高手，我1月份做细胞周期，分析员说我的样本细胞碎片含量过多，实验结果没有意义。我是胰酶消化6-8分钟，1200转/分8分钟，加pbs1ml混匀后1200转/分8分钟，弃上清后加70%乙醇4度固定。两周内染色上机。谢谢
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爱老虎游tt[使用道具]
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发表于 2012-3-23 13:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议当天准备标本当天做，两周时间太长了。
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-3-23 13:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
也许是你在收样本之前样本的状态就不是很好。
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HPLC使者[使用道具]
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发表于 2012-3-23 13:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得可能是细胞状态可能不是太好，如楼上说。另一方面，周期最好在一周内做掉，用PBS洗的时候应该是可以洗掉碎片的。所以上机前你要用PBS把乙醇洗掉，同时也是洗去碎片过程
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ququer787[使用道具]
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发表于 2012-3-23 13:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的样品加药处理了没有？如果有，过强的药物作用也会导致碎片增多。

另外，凡涉及吹打的步骤均要小心操作，以免产生碎片。

上完机的样品可以保留，放到显微镜下观察，看看细胞形态是否异常，碎片是否多等等
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wsll[使用道具]
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发表于 2012-3-23 13:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
按你的操作流程，不出碎片才怪
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c86v[使用道具]
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发表于 2012-3-23 13:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

等两周再做？我一般都是即收即做。
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duoduo[使用道具]
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发表于 2012-3-23 13:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们转速一般是800rpm，5min
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2012-3-23 13:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
"胰酶消化6-8分钟，1200转/分8分钟，加pbs1ml混匀后1200转/分8分钟，弃上清后加70%乙醇4度固定"

首先要保证细胞处于好的状态，对数生长期，然后是检查胰酶消化是否过头，离心转速太快，时间过长。乙醇浓度70%是指终浓度，需考虑残留PBS量。固定后放4度时间基本没问题。
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发表于 2012-3-23 13:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胰酶消化时间有点长吧，细胞状态可能也不太好，再有就是时间有点长，最好收集完就去上机好些
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