小中大[求助]双荧光素酶检测数值不稳定的问题
说下具体的试验设计，这样比较好讨论。
试验目的是要检测与靶基因作用的miRNA，将靶基因构建在pGL3-control载体上，miRNA构建在pcDNA载体上，内参质粒用pRL-TK。使用的试剂盒是威格拉斯的，转染的细胞株是293，用的是24孔板。三个质粒共转染。
转染体系是：pcDNA 200ng； pGL3 50ng； pRL 1ng。
转染24小时后测荧光素值，裂解15min，震荡5min，离心取上清测量。
测量结果总是内参的值比Luciferase值高3到5倍，设三组平行试验，三组试验测出的值Luciferase/内参值及其不稳定，重复多次都是这样，举个例子，这个还算是差的比较少的一组了。
Luciferase 内参 比值
平行一 411.9 1021 0.404
平行二 154.1 545.2 0.283
平行三 605.5 1554 0.390
大家试验过程中又遇到过相同的问题吗？我的试验步骤已经写的很详细了，哪位高手看着要是发现是什么地方出了问题，劳烦指教一下。
另外又一个疑问：按照双荧光素检测的原理来看，有了pRL质粒作为内参的话，是可以去除试验之间存在的误差，如细胞数目，转染效率之间的差异，按这样的说法，那多次重复试验测的值应该是差不多，并且具有比较性的，可是我重复试验的值完全不具有重复性，波动非常的大，连波动的趋势上来看都不具有重复性，这是什么原因，难道是我试验的方法上什么地方出问题了？
