小中大[求助]细胞生长状态不好
已经有半年的时间了,细胞状态一直不好,现将过程及分析发上来,请高手帮忙看一下,能否找到解决的办法。
我是在做单抗的公司,研发部和生产部同时养细胞,用的是相同的培养液(DMEM粉末自配,使用很多年的配方)和血清(Hyclone新生牛血清,原装进口),除了装培养液的瓶子,其他物品如培养瓶、吸管都是一次性的,进口的,枪头是国产的。今年3月,前后不差10天,两边相继出现问题,细胞状态不好,培养瓶底不干净,有小黑点,表现与大家说的“黑焦虫”类似,游动、晃动,与细胞此消彼长,但不除根。
更换国产血清,也有这种情况,并且国产血清养的细胞量不如Hyclone的。
更换培养瓶,也是这种情况。
更换成Solarbio的液体培养液,仍是如此。
并且最终发现,别的培养液和血清的培养效果最终不如原来的我们用的培养液和血清。
曾经利用五一假期彻底消毒,环境、用品、培养箱,全面停产一周,重新开工仍是如此。
开始时我们认为是黑焦虫导致细胞生长不好,认为是血清带进来的,因为发现血清中黑点比较多,但单独培养血清或不同浓度血清的培养液,发现黑点数量并不是增加很快,因为黑点太小,计数困难,只能尽力去计,不能完全准确。
细菌污染可以排除,将细胞拿去做过鉴定,不是细菌污染。
后来老板来看,他认为这是细胞生长状态不好的产物,即是细胞碎片。现在需要查找原因,找到是什么导致细胞状态不好的。但我们确实没有改变什么,或者说想不起来改变了什么。用品试剂都是跟原来一样的,人员也是一样的。
让总部寄来细胞(国外,与以前相同的方式寄),又出现另外的问题,来时生长还行的细胞,到了这边就养不活了,并且不是马上就死掉,看起来,细胞是长起来又死了,或者说是一边增殖一边死亡,最后全都死掉了。
吃午饭了,下午回来继续,拜请高手帮忙解决。