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标题:[求助]细胞生长状态不好

viviwang1987[使用道具]
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[求助]细胞生长状态不好



已经有半年的时间了,细胞状态一直不好,现将过程及分析发上来,请高手帮忙看一下,能否找到解决的办法。
我是在做单抗的公司,研发部和生产部同时养细胞,用的是相同的培养液(DMEM粉末自配,使用很多年的配方)和血清(Hyclone新生牛血清,原装进口),除了装培养液的瓶子,其他物品如培养瓶、吸管都是一次性的,进口的,枪头是国产的。今年3月,前后不差10天,两边相继出现问题,细胞状态不好,培养瓶底不干净,有小黑点,表现与大家说的“黑焦虫”类似,游动、晃动,与细胞此消彼长,但不除根。
更换国产血清,也有这种情况,并且国产血清养的细胞量不如Hyclone的。
更换培养瓶,也是这种情况。
更换成Solarbio的液体培养液,仍是如此。
并且最终发现,别的培养液和血清的培养效果最终不如原来的我们用的培养液和血清。
曾经利用五一假期彻底消毒,环境、用品、培养箱,全面停产一周,重新开工仍是如此。
开始时我们认为是黑焦虫导致细胞生长不好,认为是血清带进来的,因为发现血清中黑点比较多,但单独培养血清或不同浓度血清的培养液,发现黑点数量并不是增加很快,因为黑点太小,计数困难,只能尽力去计,不能完全准确。
细菌污染可以排除,将细胞拿去做过鉴定,不是细菌污染。
后来老板来看,他认为这是细胞生长状态不好的产物,即是细胞碎片。现在需要查找原因,找到是什么导致细胞状态不好的。但我们确实没有改变什么,或者说想不起来改变了什么。用品试剂都是跟原来一样的,人员也是一样的。
让总部寄来细胞(国外,与以前相同的方式寄),又出现另外的问题,来时生长还行的细胞,到了这边就养不活了,并且不是马上就死掉,看起来,细胞是长起来又死了,或者说是一边增殖一边死亡,最后全都死掉了。
吃午饭了,下午回来继续,拜请高手帮忙解决。
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ququer787[使用道具]
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回复 #1 viviwang1987 的帖子

楼主养的是啥细胞???
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viviwang1987[使用道具]
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杂交瘤细胞
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ququer787[使用道具]
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回复 #3 viviwang1987 的帖子

这种情况,基本上问题是出在溶液系统里,先从查溶液、血清、批次配制记录开始分析,看看能不能确定是1种成分、还是多个成分的问题。如果是多成分的问题还要考虑用水。

另外杂交瘤细胞的话,还要注意pH值与代谢以及细胞增殖的数据,确切说就是多少培养液维持多少细胞、维持多少时间的技术参数,以及多少培养液多长时间增殖多少细胞的技术参数,查1下上游工艺标准,看看有没有比较大的差异。
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yychen[使用道具]
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啊,GIBCO的新生牛血清比国产的还便宜,换国产的干啥,,,

你那问题最有可能是培养液污染支原体
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hold住[使用道具]
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细胞状态更新:最近算是找到原因了,研发部用的培养箱有问题,但具体问题出在哪里还是无法断定。
生产部的细胞状态基本正常,但是同样处理的细胞拿到我们这边就养不好,感觉溶液非常容易变黄。测了一下CO2浓度,为5%,是完全正常的呀。分析影响培养箱中细胞的因素应该只有2个,温度与CO2浓度,温度用温度计测是37度,CO2浓度也是5%,那还会有什么影响细胞的生长?溶液系统应该是没问题的,因为别的培养箱养相同的细胞是正常的。
快要崩溃了,今年的工作就在细胞这里停滞不前,真的不知道要怎么办才好,请各位高手给点建议吧,多谢了。
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49888[使用道具]
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我也最近遇到这种情况,温度和CO2显示都是正常的,但是PT67细胞复苏后,培养皿培养,第二天观察有部分细胞贴壁,后换液,第三天早上观察,细胞就全部死光光了,但是培养基很快就变得有点紫红色,哎,不知道办呢?请各位大侠帮帮忙。
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abc816[使用道具]
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楼上的考虑一下是不是培养基的问题
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zzzz[使用道具]
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我们最近也遇到这种情况 实验停滞不前 抑郁
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ROSE李[使用道具]
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我们实验室养的细胞最近也有这种问题,并且我们实验室的培养箱也污染了两次,很郁闷,正在找原因。
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