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标题:[求助]小鼠流式分离T淋巴细胞，需要立即分离吗？

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发表于 2012-3-24 12:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]小鼠流式分离T淋巴细胞，需要立即分离吗？



请问大家下个问题哦，小鼠处死，想要流式分离测定测定CD4+和CD8+T细胞！摘眼球也就能取到0.6ML血，这个数量能上流式吗？当然脾脏的淋巴细胞也要测定。还有，取得外周血和脾脏后，需要哪些处理呢，立即上流式测定吗?在园子里找了找，没寻到满意答案。希望高人不吝赐教，感激感激！
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发表于 2012-3-24 12:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 kent 的帖子

高人，感谢您的解答！初步是想用流式分选出T细胞亚群，并测定细胞数目。观察指标就是看亚群细胞的比例和数目。刚才在园子看到别人的方法，要用淋巴细胞分离液分离出单核细胞，后上尼龙棉柱，最后流式分离出T淋巴细胞！请问高人哪里有这方面的资料，后辈要仔细研读。。。。
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发表于 2012-3-24 12:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #4 kent 的帖子

终于明白我是检测亚群的数目和比例，不需要分选！刚接触流式，见笑了。高人，我刚读到小鼠因血量较少，推荐多重标记，你觉得在检测时有什么要注意的吗？
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发表于 2012-3-24 12:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
小鼠血是比较少的，但是做流式检测还是足够的。
你先试试做做看，有什么问题再联系。

+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++

想要测小鼠的CD4，CD8，CD25，目的是看治疗前后T细胞亚群数量比例的变化，CD3是否需要加上呢？另外，ＰＥ，ＦＩＴＣ等荧光应该怎么分配呢？
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发表于 2012-3-24 12:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
CD3没有必要加上。
荧光素怎么分配主要看你的流式细胞仪有哪些流式通道可以使用。
如果可以用APC荧光素，可以使用CD4-FITC、CD25-PE和CD8-APC。
如果不能用APC，可以使用CD4-FITC、CD25-PE和CD8-PerCP或者CD8-PE-Cy5。
当然这只是一种方案。

——————————————————————————————————————————————————————————————

这个版块有您这位专业的老师真好啊，辛苦了！
除了比例，我还想想看看数量，所以觉得CD3加上更为科学！另外外周血和细胞的抗体是选用同一种吗？我想选用biolegend,但说明书还没过来，在这先问上句。另外MBL的抗体怎么样呢？
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发表于 2012-3-24 12:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 kent 于 2012-3-24 12:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

1、流式检测无法直接得到绝对数量，直接得到的一般是比例，当然也可以通过一定的辅助方法得到绝对数量。
2、你要加上CD3当然更好。但是并不是说不加上CD3就无法得到绝对数量，加上CD3后就可以得到。其实加不加CD3结果应该 ...

呵呵，老师，我漏了2字，是外周血和脾脏细胞能用一种抗体吗？见笑了，谢谢老师思路清晰的解答~~~
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superboy[使用道具]
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发表于 2012-3-24 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 kent 于 2012-3-24 12:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')



完全可以。


小鼠曾经尾静脉注射转染GFP的干细胞，干细胞的趋化性使得应该表达于受损部位。这样会不会对血液样本和脾脏上流式造成干扰呢？听说GFP和FITC是一个通道！另外血液样本和脾脏样本上流式之前应该如何处理呢？
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