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标题:[求助]CIK细胞的培养

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发表于 2012-3-24 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]CIK细胞的培养




从小鼠脾脏获取CIK细胞，很多文献只是简单提到，求取如何从脾细胞获得CIK细胞，是用原代的组织块培养法吗？直接将脾脏组织用眼科剪碎后将砕小的组织帖附在培养瓶，待脾细胞从组织内逸出？需要用胶原酶吗？
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发表于 2012-3-24 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

文献里一般是第一天加1000U/ml IFN-g，第二天补加300U/ml IL-2，50ng/ml CD3e和100U/ml IL-1a。
我试过分离后直接加1000U/ml IL-2与50ng/ml CD3e，8d后能得到超过80%的CD3+NK1.1+ cell。做做预实验应该也可以了。
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发表于 2012-3-24 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我个人认为CIK细胞还是值得研究的，但是取材的确不太容易
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-3-24 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我培养过人的CIK，我是将人的单核细胞培养两小时后，吸出非贴壁细胞经过离心弃上清后，加入完全培养基。加入INF-γ(1000u/ml)，24h后添加IL-2(300u/ml)、IL-lα(l00u/ml)，鼠抗人CD3单抗(50ug/ml)。每3-4天等量扩增，所加因子同上。分离细胞的当天计为0天。在第3天时取出贴壁的细胞进行半量换液，吸取一半培养液，加入适量的培养液，再补加IL-4和GM-CSF继续培养。可能跟鼠的不一样，仅供参考
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发表于 2012-3-24 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
文献中谈到加入IFN-gammar1000u/ml，以及IL-2(300u/ml)，但是买回来的抗体都是多少微克的，说明书也并未谈到1U和微克的换算关系，恳求各位高手相助，指导如何换算。不胜感激。
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发表于 2012-3-24 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1、从小鼠脾脏得到淋巴细胞很简单的，直接研磨就可以，然后破红就可以得到淋巴细胞。你想要CIK细胞，直接用细胞因子处理得到的脾脏淋巴细胞就可以了。
2、现在很少见到有人提到或者研究CIK细胞了，这种细胞基本上已经退出历史舞台了。建议楼主不要再研究这种细胞了，没有前途的。

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请教可以把你的方法再说详细点，可以吗？我把组织剪碎后通过200母的尼龙滤网可以吗？
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发表于 2012-3-24 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
目前肿瘤的生物治疗CIK细胞是其中之一,不能说CIK细胞治疗没有效果.只是单用CIK细胞疗效较差.因此我说上面的楼主不要武断下结论:"CIK细胞已经过时"
CIK细胞联合其固有免疫细胞在某些肿瘤的治疗中还是有效的.
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发表于 2012-3-24 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
目前肿瘤的生物治疗CIK细胞是其中之一,不能说CIK细胞治疗没有效果.只是单用CIK细胞疗效较差.因此我说上面的楼主不要武断下结论:"CIK细胞已经过时"
CIK细胞联合其固有免疫细胞和适应性免疫细胞在某些肿瘤的治疗中还是有效的.

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那可能是我孤陋寡闻了。
不知道CIK在哪些肿瘤的治疗中是有效的？是否有相关文献？
我也学习一下。
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发表于 2012-3-24 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
文献里一般是第一天加1000U/ml IFN-g，第二天补加300U/ml IL-2，50ng/ml CD3e和100U/ml IL-1a。
我试过分离后直接加1000U/ml IL-2与50ng/ml CD3e，8d后能得到超过80%的CD3+NK1.1+ cell。做做预实验应该也可以了。
请教：1000U/ml IFN-g需要加多少微升的IFN-g？300U/ml IL-2需要加的量是多少？说明书上没有给出U和体积的换算关系呀
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