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标题:[求助]培养人血单核细胞明胶应该怎样灭菌

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发表于 2012-3-24 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]培养人血单核细胞明胶应该怎样灭菌




我养的是人血单核细胞，培养瓶要事先铺明胶，养了一段时间，细胞长得总是不好，我先先后后不停的找原因，以前明胶是121度30分钟，是不是这样明教就变性了，是不是长不好的原因之一，那明胶应该怎样灭菌呢？用哪一种明胶好一些？谢谢
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发表于 2012-3-24 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

因为不铺明胶，细胞很难贴壁，总是长不好
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发表于 2012-3-24 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

血细胞本来不就是悬浮生长的吗，为什么想让它贴壁生长呢
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发表于 2012-3-24 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为不铺明胶，细胞很难贴壁，总是长不好

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你那个瓶子是不是玻璃的？还是表面没有经过处理的？换换表面经过处理的瓶子试试吧
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-3-24 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我养的是人血单核细胞，培养瓶要事先铺明胶，养了一段时间，细胞长得总是不好，我先先后后不停的找原因，以前明胶是121度30分钟，是不是这样明教就变性了，是不是长不好的原因之一，那明胶应该怎样灭菌呢？用哪一种明胶好一些？谢谢

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还有，我们用得明胶是A型的，据说B型的游离的碳链要多很多，似乎更容易使细胞贴壁，但是我们的成纤维细胞用A型的足矣。不知道你那个细胞用B型的会不会好一点。个人意见仅供参考
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发表于 2012-3-24 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果不铺明胶，在收获细胞的时候，很难吹打下来，如果铺上明胶，就像铺了一层地毯，收获的时候，只要吹打下来明胶，细胞就全下来了，以前就有人这样做过，但是已经5年了，我再问他，他也忘了很多，而且临床一忙，也顾不上知道我。在实验方面，我是菜鸟。每天辛辛苦苦做到后半夜，可总是不理想。
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发表于 2012-3-24 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是一次性培养瓶，进口的，75平方厘米的。一次分离400ml全血中分离出来的白细胞。
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发表于 2012-3-24 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你一次都能搞到400ml全血做实验，基金应该不是问题，建议楼主用磁性分离的方法纯化单核细胞效果较好。

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请问你所说的磁性分离是不是使用磁珠的那种方法？
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发表于 2012-3-24 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果不铺明胶，在收获细胞的时候，很难吹打下来，如果铺上明胶，就像铺了一层地毯，收获的时候，只要吹打下来明胶，细胞就全下来了，以前就有人这样做过，但是已经5年了，我再问他，他也忘了很多，而且临床一忙，也顾不上知道我。在实验方面，我是菜鸟。每天辛辛苦苦做到后半夜，可总是不理想。

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你是不是想要分离全血单个核细胞中的DC细胞？
像这种本身就有点贴壁特性的细胞
短期粘附后贴壁
洗下来吹打时候就用PBS就很容易吹打下来的了
我们实验室就是这么做的
没有用明胶那么麻烦。
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tie8[使用道具]
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发表于 2012-3-24 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我要分离全血中的单核细胞，诱导分化成巨噬细胞，然后检测膜上的钾离子通道。在西安能做磁珠分离吗？哪里做？还有，我虽然经费不愁，但是血是没有花钱的，我前面提的试验方法是我们实验室的师兄摸索出来的，而且成功了。但是我再用，好不容易养活了，但是细胞凋亡的很多，提RNA总是结果不好。进了实验室5个月了，还没有结果出来，心急如焚。
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