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标题:[求助]细胞铺板不均怎么办？

hustwb[使用道具]
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发表于 2012-3-26 13:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞铺板不均怎么办？




我铺的6孔板老是出现中间有一大团细胞，周围散在少许细胞，很不均匀，这样的话会不会影响药物作用的效果呢？
搜了一下，有说铺完后板子要晃的，还有说不晃的、、、
请教各位战友，有什么好的对策没？
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hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2012-3-26 13:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得铺板不均匀可能是由于，铺板之前是要离心的，离心后细胞形成细胞块，如果重悬时不充分，铺板的时候自然就不均匀了。
另外，细胞的贴壁和成活都和细胞的浓度有关系，往往是细胞越稀越难成活。
我刚刚开始培养海马神经细胞，经验有限，仅供参考。
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-3-26 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

消化的时候 一定要充分 否则硬吹下来的细胞都是一团一团的
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-3-26 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要摇的,消化时尽量把细胞消化的散一些,然后滴加时要分散加细胞进孔,再前后\左右摇,记得千万别旋转着摇.
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loli[使用道具]
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发表于 2012-3-26 13:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我铺完后一般都用平板机摇一下，还好，一般不会抱团
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2012-3-26 13:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

想问下，你们铺板之前要细胞计数吗？一个6孔板或24孔板要加多少细胞啊？
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发表于 2012-3-26 13:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

离心之前，细胞要尽量打散，大部分呈单个状态。离心后，要充分悬浮！
还有转移到六孔板后，是要晃得！晃的时候最好不要让那个细胞液转圈，不然细胞就全被带到中间去了，就会不均匀！
我也刚养细胞一个多月，最开始也会这样。意见仅供参考~
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-3-26 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

铺细胞前最好先用培养基完全润湿6孔板的底部，加细胞的时候多点均匀滴加。不用晃。

加细胞的数目应该根据药物作用时间，细胞的大小决定。具体情况具体分析。
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hustwb[使用道具]
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发表于 2012-3-26 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

确实要前后走后晃，多加点培养基 晃的均匀一点，不能摇 不然都跑中间去了
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bohe221[使用道具]
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发表于 2012-3-26 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我今天种的六孔板（20w细胞），晚上去看也不均匀。
2ml培养基，我先加1ml到孔里，然后剩余的1ml加到1.5ml的ep管中，加入细胞再吹匀，逐滴加到孔里。看来是旋转摇了原因。
细胞贴壁感觉不如瓶子贴得好。
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