细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]细胞冻存液的配置

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 16  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]细胞冻存液的配置

flower-201[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74055
精华 0
积分 443
帖子 605
信誉分 100
可用分 3785
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
1

发表于 2012-3-26 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞冻存液的配置




请教细胞冻存液的配置
顶部
chuntian1983[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76393
精华 0
积分 421
帖子 522
信誉分 100
可用分 3423
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
2

发表于 2012-3-26 17:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

50%小牛血清　　４０％不完全培养液　10%DMSO（二甲亚砜）或１０％DMSO（二甲亚砜）　９０％小牛血清
顶部
ero11[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75131
精华 0
积分 684
帖子 1028
信誉分 100
可用分 5953
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
3

发表于 2012-3-26 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

冻存液配制：
20％血清、10％DMSO、70％1640培养液；或90％血清、10％DMSO，更可防止细胞内冰晶形成。
DMSO在4℃时对细胞无明显毒性，分子量小、溶解度大、易透过细胞膜，降低细胞外未结冰溶液中溶质浓度，使细胞免受高浓度溶质的损伤,细胞内水分也不会过分外渗，避免了细胞过分脱水皱缩；DMSO与水分子结合，可使冰点下降，减少细胞内冰晶的形成，从而减少冰晶损伤.
顶部
lixi559[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73492
精华 0
积分 560
帖子 820
信誉分 100
可用分 4896
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-23
状态 离线
4

发表于 2012-3-26 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我冻的是内皮细胞，要求是90%完全培养基加10%血清即可
顶部
伊莎贝拉[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79367
精华 0
积分 253
帖子 226
信誉分 100
可用分 1911
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
5

发表于 2012-3-26 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我冻得是h9c2，要求10%
DMSO+90%小牛血清。我们用的是1.5ml冻存管，加1350微升小牛血清+150微升DMSO
顶部
ha111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72969
精华 0
积分 821
帖子 1239
信誉分 101
可用分 7048
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
6

发表于 2012-3-26 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

通常细胞冻存的方法是：第一，用70%适合细胞培养生长的培养液（如1640，DMEM等）进行冻存细胞的稀释，浓度调到5*10 6/ml；第二，20%的胎牛血清，第三，10%二甲基亚砜。按以上顺序添加，最后加适量双抗，同时冻存时要在程控仪下进行，最后到液氮中长期保存。
顶部
leifengta[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77488
精华 0
积分 514
帖子 748
信誉分 100
可用分 4517
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
7

发表于 2012-3-26 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我冻过SGC7901和BGC823，都是10%DMSO+90%完全培养基（1640），周围同学也差不多都是这样配的。
顶部
zranqi_1[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77471
精华 0
积分 409
帖子 497
信誉分 100
可用分 3298
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
8

发表于 2012-3-26 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室有两个版本的配法 :
1. 10%DMSO+90%小牛血清
2. 10%DMSO+30%小牛血清+60%完全培养基
顶部
langlang[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77033
精华 0
积分 668
帖子 976
信誉分 100
可用分 5741
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
9

发表于 2012-3-26 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

10%DMSO+20%FBS+70%DMEM
顶部
milkdog[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79280
精华 0
积分 500
帖子 719
信誉分 100
可用分 4366
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-9
状态 离线
10

发表于 2012-3-26 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
本实验室的配方：

2X冻存液20%DMSO+40%FBS+40%DMEM
冻存之前新鲜配置，4度预冷。
细胞用完全培养基或DMEM悬浮，加入等量的2X冻存液，1ml/冻存管
转移至nunc程序性降温盒。
-70度过夜
第二天转移至液氮
可保存超过3年以上
顶部
 16  1/2 12››