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标题:[求助]静脉内皮细胞培养

biabiade[使用道具]
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[求助]静脉内皮细胞培养




最近又做了几次脐静脉内皮细胞原代培养,仍旧是没有成功,上次的培养消化下来大约有米粒大小沉淀,加入培养液后在镜下观察,看到一团一团的细胞,很高兴,以为可能是,但24小时后观察觉得贴壁的不多,又放了一天后换的液,结果贴壁的也不多,而且感觉形态也不像,真郁闷!不知哪出了问题,迷茫中.......
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mamamiya[使用道具]
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用明胶或者鼠尾胶原等铺培养瓶或者培养板试试,应该贴壁的会多吧,我也是新手,也是来学习滴
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biabiade[使用道具]
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明胶好像很贵,到时可以用多聚赖氨酸铺一下试一试
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我在昨天做了一次HUVEC的原代培养,大约20cm的脐带。我用0.25%的胰酶消化,消化下来的细胞蛮多的。没有基数,直接接种在24孔板中,三个孔,今天早上看,细胞贴壁蛮多的。形态和活力都不错。
你用的是什么培养液?
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1 明胶不贵吧?而且你用也就是0.5% 或1% 的浓度。100mL才0.5g。
2 我觉得应该是你培养液的选择问题,你是用M199+内皮生长因子,还是用的是EGM-2,如果条件允许,建议你用EGM -2.大约500mL,3000元。我看到一些高分文章都是用的这个培养液。

还有方法最好按照文献上来,如果文献上没有加明胶,你最好不要改动,否则写文章时会有很多麻烦,例如你改进后的方法是否具有可行性,是否会对你的正常实验产生影响等。

希望我的回答对你有所帮助。
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我在昨天做了一次HUVEC的原代培养,大约20cm的脐带。我用0.25%的胰酶消化,消化下来的细胞蛮多的。没有基数,直接接种在24孔板中,三个孔,今天早上看,细胞贴壁蛮多的。形态和活力都不错。
你用的是什么培养液?

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你用生长因子了吗?我用的M199,没有加生长因子 ,你胰酶消化几分钟啊?我的也有沉淀,但贴壁的少,而且细胞数也不怎么多,不是说不加生长因子也会贴吗?难道是没加因子的缘故。
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1 明胶不贵吧?而且你用也就是0.5% 或1% 的浓度。100mL才0.5g。
2 我觉得应该是你培养液的选择问题,你是用M199+内皮生长因子,还是用的是EGM-2,如果条件允许,建议你用EGM -2.大约500mL,3000元。我看到一些高分文章都是用的这个培养液。

还有方法最好按照文献上来,如果文献上没有加明胶,你最好不要改动,否则写文章时会有很多麻烦,例如你改进后的方法是否具有可行性,是否会对你的正常实验产生影响等。

希望我的回答对你有所帮助。

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谢谢哦,我用的M199没加生长因子,请问我的细胞不贴和这个原因有关吗?不是不加因子,也能养出来吗?只是传的代数比较少。
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我用的是高糖DMEM+10%FBS 没有加因子。昨天原代取材,今天看起来长的不错。
担心的是这样的培养能不能传代。
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最好用EGM-2全培养基,如果是M199,必须加内皮生长因子,否则细胞不会长,或者长得就不是内皮细胞。

用高糖DMEM?你在哪篇文献看到的?我没看见过。

希望我的回答对你有所帮助。
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biabiade[使用道具]
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谢谢了,今天有老师建议我铺板促贴壁,他说生长因子不加也应该能贴壁,只是细胞可能长得不好。我明天先试一下。
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