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标题:[求助]帮忙鉴别这是什么细菌污染？

caihong[使用道具]
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发表于 2012-4-5 12:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]帮忙鉴别这是什么细菌污染？




本人在做羊骨髓间充质干细胞原代培养过程中连续三次出现以下一模一样的细菌污染！请园子里的战友给予指导。


以下是我做原代培养的大致过程：器械高压消毒，髂骨穿刺取羊骨髓液，离心，弃上清，加培养液吹打混匀，接种到25cm的培养瓶。第三天用培养液行半量换液，第五天全量换液。第五天全量换液后，显微镜下观察见如下图片。而且这中细菌在20、40倍镜下观察会动，见视频。而且细胞很少，几乎看不到干细胞！不知道什么原因，以前师兄也是同样的方发培养的细胞很好。没出现这中情况。


自己分析了，排除了很多原因，不知道问题出在哪里。细胞培养过程中操作污染的可能性几乎可以排除，因为我们是两个不同的人分开来培养的6瓶细胞，骨髓液是一起取回来的，还有，我还养了大鼠的间充质干细胞，东西（器械和培养基等）都是一样的，大鼠的干细胞很好，没出现任何这种会动的东西！开始第一次怀疑是取骨髓液操作出了问题，但后面两次很小心，也很仔细排除了，应该问题不大！！！

现发帖求助，请高手给予分析，有没有人以前遇到过类似情况，问题出在哪里？如何解决？
是否有可能动物自身骨髓或血液中原本就存在这种细菌——寄生菌？？


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 小中大

继续图2


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发表于 2012-4-5 12:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
继续图三(以下几张张图片很清楚)


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 小中大

继续图四


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 小中大
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 小中大
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发表于 2012-4-5 12:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

啊，这个光看没法鉴定吧，再说污染了不扔留着干啥
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caihong[使用道具]
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 小中大

经过多方求教，去微生物教研室请老师看过，还给做了革兰氏染色，没染色上。也不知道是什么。后来有同学在生理教研室读研，去那里求教，有个师姐一眼便看出是——黑胶虫！
说可能是培养液和器械出问题最多见，于是把培养液5ML放入培养瓶中培养观察试验中，还没发现该东西出现。
细胞留着放了2天没管它，昨天去看发现有细胞长出，只是形态很差，数量很少。
尝试着用PBS冲洗，冲洗后显微镜下观察发现黑胶虫少许多！
今天再次观察，细胞呈集落生长，越来越多！而黑胶虫渐渐变少了！视野下就见几个动的虫！
大家有这方面经验的来谈谈，黑胶虫是怎么一回事？这样处理合理吗？细胞还能用吗？据说这东西和细胞有此消彼长的关系。请高手指点！
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发表于 2012-4-5 12:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得可能就是做原代里面的杂质，你是在高倍镜下看的吧，是不是都在做布朗运动？我也做原代细胞，刚开始培养的时候就是有很多杂质小黑点在做布朗运动，随着换液传代就很少了
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caihong[使用道具]
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 小中大
我觉得可能就是做原代里面的杂质，你是在高倍镜下看的吧，是不是都在做布朗运动？我也做原代细胞，刚开始培养的时候就是有很多杂质小黑点在做布朗运动，随着换液传代就很少了

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这些东西动的很厉害，不像是布朗运动，还有，这些东西随培养时间的延长而增加，布朗运动会这样吗？曾经也考虑过这个，但我们实验室的博士说是细菌就没往这个方面考虑，开始几次的细胞就直接扔了，后来这一次实在没办法，才试着PBS冲洗，发现有效果！
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