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标题:[求助]载药脂质体做细胞药效的怪现象，求高人

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发表于 2012-4-5 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]载药脂质体做细胞药效的怪现象，求高人



我最近一直在做阿霉素脂质体的细胞药效学实验，但是每次作出来都很怪异：高浓度的脂质体孔在显微镜下看，培养液里很浑，像是染菌了，底部还有深色团状的东东，加入MTT后高浓度颜色特别深，检测值要远远超出对照孔。低浓度的就没有这种现象。我知道染菌了就是这种现象，但是我每次都过220nm的滤膜除菌，不知道是什么时候染菌的。如果是游离阿霉素的话也不会出现这种情况。
我做这个实验都是将做好的脂质体先过220nm膜除菌，然后用培养液由高到低逐渐稀释配成一系列浓度的溶液，加到96孔板中，培养72小时（这时显微镜下看就会出现上述现象），吸出培养液，加入MTT培养液溶液，3h后弃去MTT，加DMSO 150μL，酶标仪检测。
不知道细胞有支原体污染的话会不会出现这种情况？
请给位高人指教，不胜感激！
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发表于 2012-4-5 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近用CCK8检测某药物对细胞的毒性作用，前几次都是加药48小时后加入CCK8试剂孵育2小时测各孔吸光度值，结果不太理想，昨天尝试加药24小时后检测，加入CCK8孵育1小时、2小时后分别测吸光度，几乎各浓度梯度药物复孔都有1-2个孔吸光度出现负值，对此有些不解，各位大侠有遇到这种情况吗？望不吝赐教！
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2012-4-5 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你为啥不能延长时间呢.
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发表于 2012-4-5 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #3 mimili_901 的帖子

考虑以前结果不理想的原因是否与细胞加药前培养时间长短有关，所以尝试一下加药后24小时，应该是相关的。又铺了两块儿板，等待结果，继续摸索。
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plaa[使用道具]
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发表于 2012-4-5 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做MTT也会出现负值。
你做CCK8应该先预实验，在加CCK8后半个小时到四个小时内的这段时间内多测试几个时间，找出趋势最好的时间后，以后就用这个时间。
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newway[使用道具]
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发表于 2012-4-5 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如何分析趋势是否是最好的时间呢？我发现孵育时间越长，0D值越大，四小时时可以达到2以上，这个是机器原始值
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dog002[使用道具]
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发表于 2012-4-5 13:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

唉，同疑问啊。我做的时候也是会出现2以上甚至3的数值，但有些又是负值。
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duoduo[使用道具]
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发表于 2012-4-5 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哎 我也是 达到2甚至3，负值倒是没出现
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-4-5 14:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

OD值高应该是和细胞数有关系的吧，CCK8的说明书上检测的细胞数是10000个细胞，不知大家每孔细胞数都是多少，我是10的5次方，淋巴细胞，4小时以后的值也没有超过2，出现负值可能跟酶标仪有关吧，我在蛋白定量时会出现负值，有时是因为浓度太低了，有时是不明原因的，CCK8还没有出现过
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-4-5 14:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我测试mtt也有负值
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