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标题:[求助]我的骨髓基质干细胞怎么了？

pencil菲[使用道具]
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发表于 2012-4-5 15:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]我的骨髓基质干细胞怎么了？




我的骨髓基质干细胞原代培养生长良好，折光性好，细胞呈长梭形。可是每次传代之后，细胞形状就变了，高倍镜下呈类圆形，贴壁尚可，折光性不好，低倍镜下细胞立体感尚可。是我消化传代出现问题？还是细胞分化了？还是我培养过程有问题（但是原代生长没这问题）我问过师兄，他也没遇到过这问题。请各位高手帮帮忙，帮我分析下到底是哪个环节出现问题了，感激不尽！！！
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2012-4-5 15:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的骨髓基质干细胞最近也这样，不知道怎么回事啊？
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911[使用道具]
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发表于 2012-4-5 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 pencil菲 的帖子

未给出你的培养条件，以及你细胞的代数，不便分析原因。
BMSC体外培养8~10代，一般不会发生分化。
一般细胞不贴壁的原因有：1、胰蛋白酶消化过度；
2、支原体污染；
3、培养瓶瓶底不干净；
4、培养基pH变化；
5、培养基或者消化液配置错误、过期或者储存不当；
6、传代不及时细胞老化；
7、接种细胞浓度太低。
请你结合自己的情况，对照以上原因分析，祝实验成功！
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ROSE李[使用道具]
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发表于 2012-4-5 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加了那些生长因子亚？有些是会促向脂肪分化的。血清里面培养基里面有激素也会。
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pencil菲[使用道具]
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发表于 2012-4-5 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位帮忙分析，我用的是高糖DMEM，10%FBS；胰酶+EDTA，试剂都是直接购买，应该不会配错，没有加任何诱导剂，都在4度保存，培养瓶都一次性的。消化传代前计数有到100百万，原代5天后传的代，密度应该有达到传代水平。我看文献MSC有几种形态，那巨大扁平形的有点像，但是看多数人养出来的不会这种形态，真奇怪。到底怎么了？
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831226[使用道具]
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发表于 2012-4-5 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

基质干细胞所需的生长因子bFGF、EGF加了吗？
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-4-5 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

基质干细胞所需的生长因子bFGF、EGF加了吗？

————————————————————————————————————————————————————————————

这两样都没有加，我师兄也做这个细胞，没和我说过要加这两样，有的文献也没说，这两样必须要加吗？谢谢，还请多支招
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-4-5 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养骨髓基质干细胞也不加bFGF和EGF的，请问你养的是什么动物的干细胞，胰酶消化了多长时间，血清和培液用的哪个品牌？能否上传几张相片
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-4-5 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养的是3天的SD大鼠，在显微镜下观察消化的，时间很短，血清和培养液是HICLONE的，照片还没整理，整理好了上传。能否说下你的情况？
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-4-5 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

3天的SD大鼠也能取出基质干细胞来？好像一般用4-10周的大鼠比较多，大多集中在6-8周吧，我一般用6-8周的SD来养，消化时间太长对细胞是一种损伤，我一般只消化1分钟，使用加了EDTA的胰酶
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