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标题:[求助]融合蛋白细胞定位问题

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-4-6 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]融合蛋白细胞定位问题




构建了两个融合蛋白表达载体。转染细胞后发现荧光表达上存在有差异，是不是有蛋白定位有关？如果要进一步确定是要做共聚焦显微镜或者其他的吗？
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彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-4-6 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这张是空载体的转染后绿色荧光图，绿色荧光蛋白胞核和胞浆都存在。


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发表于 2012-4-6 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

重组质粒1的转染后绿色荧光图，绿色荧光蛋白胞浆存在。


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 小中大

重组质粒2的转染后绿色荧光图，绿色荧光蛋白胞浆存在，但是胞浆内绿色的亮点处不知道是什么结构，请高人帮忙解释下。


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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-4-6 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

能排除报告蛋白在胞内不正常表达吗？
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-4-6 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
怎么排除？
这两个融合蛋白重组质粒是不同基因的，正因为这个差异，所以我可能想进一步了解下后一个蛋白的具体定位。
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发表于 2012-4-6 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

从你所提供的图片看，质粒2更有可能是没有表达，上面的亮点更象是背景干扰。如果条件允许，可做单独表达，然后用免疫荧光的方法来对其蛋白定位进行探讨。
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-4-6 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
质粒2的肯定不是没有表达，因为我做了RT-PCR的检测，相应的mRNA的明显增高的。可能那张图不是很请清楚，我发一张低倍一点的看看
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彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-4-6 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

重组质粒2


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nn255[使用道具]
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发表于 2012-4-6 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也得过类似的结果.
重组1应该是包浆内表达,但不进核.
重组2其实也在包浆,那些绿点点,我觉得没必要的话,就别深究了.我也曾经做过这样的情况,然后就找各种细胞器验证啊....后来无果.这似乎是该蛋白在细胞内组成的某种大的集团.不清楚是什么结构.
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