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标题:[求助]关于激光共聚焦样品的制备

ququer787[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于激光共聚焦样品的制备




我是新手，准备做激光共聚焦。请问做过激光共聚焦的朋友们，样品的制备需要注意哪些方面？
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hold住[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也想知道，我是把细胞种在支架上，放在什么上看啊？
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我过几天也要做共聚焦了,可是对于样品的处理还是不太知道,查阅书籍也没找到很详细的步骤,希望有经验的高手们给我们一些指点把
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1)如果直接做活细胞观察,可以把细胞直接seed在放在6 well中的盖玻片上,然后培养,等观察时用镊子把盖玻片取出,倒扣在载玻片上就行了.

2)需要做免疫荧光染色的,可以做完染色,然后把细胞悬浮起来,滴一滴到载玻片上,盖上玻片观察.
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
补充一以下:
如果是用探针孵育活细胞，可以先做成细胞爬片，在相关处理后，探针避光孵育，完毕后，用镊子把细胞爬片取出,倒扣在载玻片上就行了.
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

需要购买专用的盖玻片和培养皿，一般的盖玻片和培养皿效果不好，薄督导不到要求，小心浪费试剂，染料比较贵
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101010[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

买国产玻片就可以，不过要泡酸过夜后再灭菌，之前可以按自己需要切片，根据大小，然后在30mm培养皿，中间打孔，用泡酸洗好的大玻片粘好，用时细胞种在切片上，切片放在皿小孔中，罐流都可以的。我们实验室十几年这种方法，不过如果活细胞工作站要求皿可以订制，很便宜，细胞可种在大玻片上，这样透光好。
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加药设备可自制，用注射器挂高 ，下面用三通接输液管接针头到浴槽里面。
请问：用什么做浴槽？浴槽中的液体怎样流出？
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

小心胶水有毒,最好买现成的玻底皿(glass bottom dish),国内有卖的.有进口的和国产的,听说国产的也是用进口玻片,比较便宜啊,洗洗还可以重复使用.
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duoduo[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对于细胞的激光共聚焦，它的处理和细胞的免疫荧光是一样的。你查一下免疫荧光的实验方法很多的。不过你要注意一下一些细节。
1、盖玻片买国产的就可以，不过有时背景较脏。你最好拿弱酸，如稀盐酸浸泡。
2、然后灭菌，比如紫外照射，两面都照射，然后放于合适的孔板中，接种合适密度的细胞于孔板中，一般较稀一些，那样容易有单个的细胞，得到较好的图片。
3、加抗体时最好能在封口膜上操作，那样很节约抗体，样品可以放到一个湿盒中，饭盒加水就可以了。一定要记住接种细胞的玻片面，别弄反了。
4、在载玻片加上一滴，防淬灭剂，用甘油配制的DABCO，将含细胞的盖玻片那一面朝向载玻片放置，周围再用指甲油或其它胶固定。用锡箔纸报住，避光4c保存，最多一个月。
5、最好染核，核好染，同时也便于观测。
6、先在普通荧光显微镜下观测你的结果，实验理想的话再去看激光共聚焦。毕竟激光共聚焦很贵。
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