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标题:[求助]血管外膜成纤维细胞的培养

bohe221[使用道具]
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发表于 2012-4-9 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]血管外膜成纤维细胞的培养



各位群友,我养血管外膜成纤维细胞好久了,一直没有养活。我是一直养成纤维细胞及平滑肌细胞的，平滑肌细胞是养活了，平滑肌细胞我用的是中膜，成纤维细胞我用的是外膜。我是用组织块法养的。请大家发表一下自己养这两类细胞的经验好吗？
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发表于 2012-4-9 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

中膜平滑肌培养:手术刀切碎中膜,贴块于含20%FBS的F12培养基中,5-7天即可长出.
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发表于 2012-4-9 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

成纤维细胞我养的时候,我试过高糖的DMEM,试过F12,试过10%FBS,也试过20%FBS,最长养了两周,就是没有长出.有谁可以帮忙下吗?
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发表于 2012-4-9 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
明天我再做一批试一下,我打算用胶原酶去做
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发表于 2012-4-9 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用胶原酶去消化了..消化完后可以看到单个细胞被消化出来...但是为什么没有培养成功啊?是不是消化过头了?
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发表于 2012-4-9 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.无菌状态下取出血管
2.在超净台内用加入双抗的培养液清洗血管并去除血管粘连的脂肪和其他组织
3.用眼科镊分离外膜
4.剪碎分离的外膜至小米粒大小
5.将剪碎后的血管外膜组织快放入配好的消化液，然后移入37度培养箱
6.等到组织快大部分消化后中止消化，然后加入含百分之10的胎牛血清的培养液培养，3－5天后即可看到贴壁的细胞
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发表于 2012-4-9 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一型胶原酶，浓度是百分之0.25
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发表于 2012-4-9 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1. 剥离血管的外膜，带一部分中层也可（可减少外膜损伤，平滑肌细胞长不过成纤维细胞），剪成为1*1或2*2mm，大小不限；
2. 将组织块在培养瓶里干涸2小时左右；
3. 加2.5ml左右培养基
4. 勿动，7天，换液；
5. 7天左右应该长出来了；
6. 快融合时传代，就OK了。
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发表于 2012-4-9 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

取6—8周雄性SD大鼠，断头处死，常规体表消毒，开胸游离取出胸主动脉，放在装有PBS的培养皿中，在培养皿下面垫上一张黑纸（便于辨别），小心分离血管外膜的结缔组织。将分离好的血管，转移到另一个培养皿中，加入含20％新生牛血清的DMEM，用眼科剪将血管剪开后，用一个眼科皮镊夹住血管的一端，用一个弯眼科镊轻轻刮去血管内膜，然后用同样的步骤刮去血管中膜。用眼科剪在DMED中将外膜组织剪成1mm3 小块。用吸管从培养皿吸出组织块，在培养瓶的底侧，贴上组织块并使之分布均匀。吸出瓶底的培养基，加入含20％浓度新生牛血清的DMED,翻转培养瓶，使贴有组织的一面向上（瓶底），在培养箱中放置2-3个小时后，再翻转培养瓶，使组织块浸没在培养基中。
如果大家比较感兴趣 可以参考一下这篇文章：Zhu DL，Herembert T，Marche P．Increased proliferation of adventitial fibmblasts from spontaneously hypertensive rat aorta[J]．J Hyenaen，1991，9：1161—1168．
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发表于 2012-4-9 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

以上三种方法是别的群友发表的..在此谢谢他们...
自己动手，丰衣足食，奖励1分，早日看到更好的资源
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