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标题:[求助]帮忙分析流式图

superboy[使用道具]
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发表于 2012-4-11 14:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]帮忙分析流式图




各位大虾，老师们：麻烦帮我分析一下这个流式图做的对吗，细胞群有分开吗，为什么交界处没有细胞呢？刚学习做流式，不会看图，帮我分析分析，万分感谢！
应用：CD8+IFN-Y+双阳性T淋巴细胞分选
所染表型：胞内表达的IFN-Y，细胞表面标志CD8分子
细胞来源：小鼠淋巴细胞
所用抗体： anti-cd8-FITC,anti-IFN-Y-PE(ebiscience)
所用仪器：BD FACSAria
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发表于 2012-4-11 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、你要说明检测的目的。
2、同型对照有没有做？
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发表于 2012-4-11 14:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
检测目的： 研究抗原特异性CD8 T细胞的数量，用CD8+IFN-Y+双阳性T淋巴细胞表示，表面染色与胞内细胞因子染色相结合。
同型对照做不做有在这个图上有影响吗？暂时没做，预实验中。
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superboy[使用道具]
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发表于 2012-4-11 14:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

补充说明
应用：CD8+IFN-Y+双阳性T淋巴细胞分选
所染表型：胞内表达的IFN-Y，细胞表面标志CD8分子
细胞来源：小鼠淋巴细胞
所用抗体： anti-cd8-FITC,anti-IFN-Y-PE(ebiscience)
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HPLC使者[使用道具]
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发表于 2012-4-11 14:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

所谓的分界线需要用对照来确定，比如你要做双阳性分选，
至少需要知道双阴性淋巴细胞图的分布，以及两个单阳性淋巴细胞图的分布，
只有在知道这些数据的基础上（最好重复做好几次），才能确定双阳性细胞的boudary line.
没有多个对照图，就无法就单个图进行分析。
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superboy[使用道具]
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发表于 2012-4-11 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那我目前还没做对照，就不能分析这个图做的好还是差了？至少有没有意义吗？能用来做最后的统计分析吗
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发表于 2012-4-11 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
通过阴性对照来调节两个荧光强度，使双阴性的细胞群处在10 e1以内，同时设定分界线。

没有有阴性对照的话，就没法调节荧光强度，更无法设定划线，没法划分界线的话，也就没法界定个群细胞了。

所以个人认为没有对照，就没法分析您这个预实验的好坏，意义更无从讲起，统计分析不会有意义。最大的意义在于使楼主对流式细胞分析有一个直观的认识，也算是最大的一个意义吧，毕竟从书本到实践的转变是很重要的一步！
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c86v[使用道具]
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发表于 2012-4-11 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
关键是不做对照没法调整光电倍增管的电压强度也就没法设定分界线了，没有合适的分界线就没法把测定管的检测结果进行界定呀。

他们不贴不代表没做，呵呵。

具体您做的这个我不太清楚，如果我们做检验发表白血病流式细胞分析的图的话，都要带对照的图的。
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superboy[使用道具]
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发表于 2012-4-11 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

经过各位热心的战友的提点，我明白了很多。预实验是没做同型对照，不过做了阴性对照，就是取部分细胞不加抗体。因为当时实验室老师说他们一般都不做同型对照。
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superboy[使用道具]
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发表于 2012-4-11 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
通过阴性对照来调节两个荧光强度，使双阴性的细胞群处在10 e1以内，同时设定分界线。

没有有阴性对照的话，就没法调节荧光强度，更无法设定划线，没法划分界线的话，也就没法界定个群细胞了。

所以个人认为没有对照，就没法分析您这个预实验的好坏，意义更无从讲起，统计分析不会有意义。最大的意义在于使楼主对流式细胞分析有一个直观的认识，也算是最大的一个意义吧，毕竟从书本到实践的转变是很重要的一步！

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那至少可以看出什么非特异性荧光强不强之类的把？
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