小中大小胶质细胞一般很容易贴壁,如果贴壁不好,可采用人胎盘胶原,牛皮肤胶原,鼠尾胶原I型,多聚赖氨酸等来包被培养板。以杭州的生友牌鼠尾胶原I型为例:
实验器材
1、乙酸,鼠尾胶原蛋白Ⅰ型(5mg/L,杭州生友生物技术有限公司),双蒸水,24孔细胞培养板(Costar,USA),过滤器(0.22μm,Millex GP,Ireland)
2、超净工作台,移液管,灭菌枪头,CO2培养箱等。
实验步骤
1、用双蒸水稀释纯乙酸为0.006mmol/L的乙酸溶液。
2、用0.006mmol/L的乙酸溶液将5mg/L的鼠尾胶原蛋白Ⅰ型稀释为0.012mg/mL,并用0.22μm的过滤器过滤除菌。
3、在24孔细胞培养板每孔滴加300μL的0.012mg/mL的鼠尾胶原,确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面,在CO2培养箱37℃的下孵育过夜,之后用PBS洗涤3-4次后直接使用。
注意:使用之前一定要用PBS洗涤培养板,因为残留的胶原会对细胞生长有抑制作用。