细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]细胞种板后很多不贴壁,急

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[求助]细胞种板后很多不贴壁,急

wsll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76794
精华 0
积分 423
帖子 505
信誉分 100
可用分 3393
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
1
 

[求助]细胞种板后很多不贴壁,急



大家好,我现在养小胶质细胞,细胞是原代培养的,2代后冻存现在复苏,复苏后传了一代,现在将其种到培养板里本想进行实验,但老是很多不贴壁,实验没法开展啊。盼高手指教
顶部
dragonkilly[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77754
精华 3
积分 596
帖子 699
信誉分 106
可用分 4371
专家分 30
阅读权限 255
注册 2011-11-21
状态 离线
2
 

你做的时候,细胞培养瓶啊、培养皿、培养板之类的包被过没?用明胶啊、多聚赖氨酸啊等等包被下会好些的呵呵
顶部
fklo83[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76573
精华 0
积分 344
帖子 368
信誉分 100
可用分 2661
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-7
状态 离线
3
 
借个地问一下楼上的,明胶如何包被,37度过夜后,用前要干燥吗?浓度是多少,用什么来配呢,多聚赖氨酸怎么用呢?
顶部
greenbee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79370
精华 0
积分 710
帖子 1119
信誉分 100
可用分 6368
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
4
 

明胶包被是从0.1%~1%浓度的都有用的,可能各种细胞适应的不太一样吧!不过记得有人说过,只要能起到这种辅助作用的话,能用浓度低的就没必要用浓度高的!
明胶包被时,使迷明胶盖满容器底部即可,37度孵箱过夜,用之前,将其倾倒掉,在超净台里干燥,再用PBS冲洗两遍即可用了!用纯水或者PBS配制都可以的!我同学有用多聚赖氨酸,用的是买来的sigma的原液呵呵
顶部
wsll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76794
精华 0
积分 423
帖子 505
信誉分 100
可用分 3393
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
5
 
谢谢各位,我的培养瓶是corning 一次性的塑料瓶也要包被吗。培养板是COSTAR的。
顶部
idea2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77656
精华 0
积分 552
帖子 783
信誉分 100
可用分 4726
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
6
 

培养瓶一般不用包被的,板子是需要包的。
顶部
KGZ564[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74472
精华 0
积分 452
帖子 583
信誉分 100
可用分 3756
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
7
 

好像进口的瓶子是经过包被处理了的,应该不用了吧,但是我用过进口的六孔板,效果也不好,还不如用明胶包被过的普通玻璃培养瓶嘿嘿嘿。这可能得看你细胞的特性吧,其实做实验不是别人说不用这么着就这么着的,自己要实验才可以啊!你都做了这么久,为这一个问题在烦恼,不如自己试一下好啦!实验不成功总得找方法解决啊不是吗呵呵,其实我也是个实验还未成功正在进行的学生,但是这是我的失败经验得出来的!呵呵,祝你好运哦
顶部
star#room[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76306
精华 0
积分 421
帖子 501
信誉分 100
可用分 3361
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
8
 

小胶质细胞是用哪个公司的一抗啊,O(∩_∩)O谢谢
顶部
wsll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76794
精华 0
积分 423
帖子 505
信誉分 100
可用分 3393
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
9
 

millipore的
顶部
dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
10
 
小胶质细胞一般很容易贴壁,如果贴壁不好,可采用人胎盘胶原,牛皮肤胶原,鼠尾胶原I型,多聚赖氨酸等来包被培养板。以杭州的生友牌鼠尾胶原I型为例:
实验器材
1、乙酸,鼠尾胶原蛋白Ⅰ型(5mg/L,杭州生友生物技术有限公司),双蒸水,24孔细胞培养板(Costar,USA),过滤器(0.22μm,Millex GP,Ireland)
2、超净工作台,移液管,灭菌枪头,CO2培养箱等。
实验步骤
1、用双蒸水稀释纯乙酸为0.006mmol/L的乙酸溶液。
2、用0.006mmol/L的乙酸溶液将5mg/L的鼠尾胶原蛋白Ⅰ型稀释为0.012mg/mL,并用0.22μm的过滤器过滤除菌。
3、在24孔细胞培养板每孔滴加300μL的0.012mg/mL的鼠尾胶原,确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面,在CO2培养箱37℃的下孵育过夜,之后用PBS洗涤3-4次后直接使用。
注意:使用之前一定要用PBS洗涤培养板,因为残留的胶原会对细胞生长有抑制作用。
顶部