细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]FACS Live Dead Assay ？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 14  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]FACS Live Dead Assay ？

伊莎贝拉[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79367
精华 0
积分 253
帖子 226
信誉分 100
可用分 1911
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
1

发表于 2012-4-12 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]FACS Live Dead Assay ？




想问论坛里有谁亲自做过FACS Live Dead Assay using-Live/Dead Reduced Biohazard Viability/Cytotoxicity Kit (Molecular Probes, Cat no: L-7013)。

尽管说明里已经说得很清楚，但是在上流式细胞仪时，需要进行哪些设置？

我对流式细胞仪还不怎么熟悉。
所以需要问清楚，因为我这两天需要做呢！
谢谢！
顶部
cocacola[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77403
精华 0
积分 534
帖子 747
信誉分 100
可用分 4576
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
2

发表于 2012-4-12 14:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 伊莎贝拉 的帖子

没做过。不过看了说明书之后，很简单，只要检测FL1和FL3两个通道的荧光。在BD FACS calibur机器上，这两个通道不需要调节补偿。
顶部
伊莎贝拉[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79367
精华 0
积分 253
帖子 226
信誉分 100
可用分 1911
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
3

发表于 2012-4-12 14:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 cocacola 的帖子

还是不明白。
在进行Instrument configuation里如何设计？如何Specify the laser and detector?
FL1和FL3？ 在experment layout里如何设计？因为live cells用FITC, 绿色的，dead cells 用PE，红色。比如我们进行干细胞表面抗原检测，会设计CD73-FITC,CD45-PE等。
我将要用的是这个试剂盒。LIVE/DEAD® Reduced Biohazard Viability/Cytotoxicity Kit #1 (L-7013)
顶部
伊莎贝拉[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79367
精华 0
积分 253
帖子 226
信誉分 100
可用分 1911
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
4

发表于 2012-4-12 14:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是我在experment layout里如何设计SYTO-FITC, DEAD RED-PE, 即可？
顶部
kuaizige[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76978
精华 1
积分 526
帖子 707
信誉分 102
可用分 4338
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
5

发表于 2012-4-12 14:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室用的机器不是你说的那个，是BD FACSCanto II Flow Cytometer.
顶部
wu11998866[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73743
精华 0
积分 569
帖子 797
信誉分 100
可用分 4850
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-27
状态 离线
6

发表于 2012-4-12 14:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是不是我在experment layout里如何设计SYTO-FITC, DEAD RED-PE, 即可？

————————————————————————————————————————————————————————————————

按照说明书上的描述，SYTO是FL1通道检测，但是DEAD RED是属于FL3通道检测的。只要设置这两个指标即可。你如果要同时使用其它抗体，必需避开这两个通道，也就是FITC、PE-CY5.5这些标记不能用。
顶部
wu11998866[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73743
精华 0
积分 569
帖子 797
信誉分 100
可用分 4850
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-27
状态 离线
7

发表于 2012-4-12 14:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室用的机器不是你说的那个，是BD FACSCanto II Flow Cytometer.

————————————————————————————————

FACSCanto就比CAlibur多1个紫外激发的激光器，其它指标都一样。
顶部
lixi559[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73492
精华 0
积分 560
帖子 820
信誉分 100
可用分 4896
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-23
状态 离线
8

发表于 2012-4-12 14:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
按照说明书上的描述，SYTO是FL1通道检测，但是DEAD RED是属于FL3通道检测的。只要设置这两个指标即可。你如果要同时使用其它抗体，必需避开这两个通道，也就是FITC、PE-CY5.5这些标记不能用。

————————————————————————————————————————————————————————

不好意思，我还是不大明白。因为之前我只做了干细胞表面多种抗原的检测。所以对于干细胞死活性检测还不知道如何做》
那如何设置FL1和FL3这两个通道？我在BD FACSCanto II的软件上没看到FL1和FL3？？？
另外，也不用做compensation control?
顶部
伊莎贝拉[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79367
精华 0
积分 253
帖子 226
信誉分 100
可用分 1911
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
9

发表于 2012-4-12 14:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不好意思，我还是不大明白。因为之前我只做了干细胞表面多种抗原的检测。所以对于干细胞死活性检测还不知道如何做》
那如何设置FL1和FL3这两个通道？我在BD FACSCanto II的软件上没看到FL1和FL3？？？
我看文献，FITC 属于FL1通道，但是PE属于FL2通道，而PE-CY5 属于FL3或者FL4通道？但如何区分？还是不懂？
另外，也不用做compensation control?
顶部
join[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72960
精华 0
积分 627
帖子 873
信誉分 100
可用分 5266
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
10

发表于 2012-4-12 14:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

补偿是肯定不需要的，因为FL1和FL3之间不需要调节补偿。
FL1和FL3是检测的通道，你可以咨询一下你们实验室检测的流式老师。我用的是FACS Calibur，用的软件不一样。
顶部
 14  1/2 12››