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标题:[求助]细胞复苏

yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-4-13 13:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞复苏



各位战友,我是一名新手.前一段时间我的细胞还好好的,不知道为什么最近C6细胞怎么都复苏不了!
我的复苏过程是这样:38~39度的温水快速孵化,加入培养基,37度的温箱培养.可是每次第二天来,都发现细胞全死了,一个贴壁的都没有.而且培养液呈橙色.
以前都是用这个方法弄的,细胞一直长的不错!!
大家能帮我分析一下吗?
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any333[使用道具]
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发表于 2012-4-13 13:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

以前复苏过这只细胞没问题？觉得很有可能是细胞冻存的问题啊
还有就是，我们通常复苏时离心去掉DMSO，或者按你的方法做，在四小时时换液这样
可能会对细胞好一点吧
培养基橙色？有污染没？有污染当然细胞不会活了！
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summerxx[使用道具]
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发表于 2012-4-13 13:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

培养基变色可以肯定是它的PH值改变了，从这个方面查找一下问题吧。自身没有问题的话就是栋存时候出问题了
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-4-13 13:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

污染都是没怎么发现,我们一起养的,他们的细胞也培养基呈橙色!!
我今天刚复苏了别人的一瓶细胞,如果没有问题就可能是细胞冻存时就有问题!!
谢谢大家了!!
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bananapeople[使用道具]
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发表于 2012-4-13 13:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

估计是冻存的问题。。。
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guagua[使用道具]
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发表于 2012-4-13 13:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有就是没有去掉DMSO，这样对细胞不好，或者是冻存一定要在3代以后冻，否则存活率低
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guagua[使用道具]
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发表于 2012-4-13 13:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

速溶之后，应加入一定量培养基（PBS或D-Hanks也可），离心，除去上清后再将细胞移至培养瓶。
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-4-13 13:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
冻存的细胞中含DMSO，会对细胞有影响的，细胞速溶后，将其转入离心管，缓慢加入培养基（10ML），离心后去掉上清再用培养基复溶转到小瓶中，这样会好些，不妨试试
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one[使用道具]
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发表于 2012-4-13 13:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
37C°融后，低速离心3，5分钟，去上清。加培养基培养。
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2012-4-13 13:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是冻存的时候污染了？
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