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标题:[求助]我的培养液,放入培养瓶,过夜就变黄...

bling[使用道具]
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[求助]我的培养液,放入培养瓶,过夜就变黄...




我的培养基配置后给细胞使用后,第二天就边黄了,我不知道1640里面有没有酚红指示剂
别人都不是用1640养的,都是用DMEM。他们的比我红很多
我调了PH值,7左右,但是依然第二天培养液就变黄了。
配方:1640:胎牛血清 9:1
外加三种因子和双抗:胰岛素,胰岛素样生长因子,表皮生长因子,还有青链霉素。
1640过滤后再加入三种因子和双抗。
配置完毕后红色就比较淡了。测PH值,在7附近,偏碱一点。
但是细胞培养时,换液,过夜后培养瓶中液体完全变黄,完全变黄。彻底的黄色,很多师兄师姐说太酸了,PH值没有调好,我就彻底晕菜了?
到底怎么搞啊,细胞倒是能活,我每天换液。
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00无名指00[使用道具]
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你的1640里是含有酚红的,因为不含酚红的1640是伍的透明的。培养基发黄是偏酸了,发紫是偏碱了。当细胞把营养消耗完培养基就会发黄。可能是你细胞长得太满该传代了,营养消耗量大导致的。
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你说的情况我遇到过,我是三天没有给细胞换液出现这种情况,原因很明显营养已经没有了,需要更换液,也许你的细胞密度过大引起,再一个一定要调节培养基的ph值,你看看你的培养基ph值怎么样
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owanaka[使用道具]
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细胞如果没有污染,就是密度大。细胞生长得最佳PH为7.2-7.4。配置过滤后7偏碱一点,对细胞来说似乎还是偏酸。仅供参考
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vivian4123[使用道具]
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1640培养基的确非常容易变黄,和你的情况相同,我也是实验室中唯一用1640培养细胞的,因为用的久了,发现换液后过几个小时,培养基就已经开始变黄,你可以观察一下。起初,我也是非常担心,但是经验说明,培养基变黄并不影响细胞生长,有时我隔两天换一次液,没问题。咨询过相关问题,有人说1640培养基的缓冲体系不好,导致液体容易变黄,我在配置培养基时加入过HEPES,增加其缓冲能力,但作用不大。
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与血清有很大关系,用不同厂家的血清影响特别大.进口的特别容易变黄,国产的不太容易.
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1640本来就比DMEM黄很多,没事的
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fsdd817[使用道具]
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有可能是支原体污染
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bling[使用道具]
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1640培养基的确非常容易变黄,和你的情况相同,我也是实验室中唯一用1640培养细胞的,因为用的久了,发现换液后过几个小时,培养基就已经开始变黄,你可以观察一下。起初,我也是非常担心,但是经验说明,培养基变黄并不影响细胞生长,有时我隔两天换一次液,没问题。咨询过相关问题,有人说1640培养基的缓冲体系不好,导致液体容易变黄,我在配置培养基时加入过HEPES,增加其缓冲能力,但作用不大。

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是的,我也发现了,就我在用1640,所以我变黄很快,让我很紧张,别人的DMEM都两天不变黄,我看了下,上午换液,下午5点就变黄。我后来也加了HEPES,但是结果加进去之后本来橙红色的培养基,变成了全黄色,不过细胞还是能长。
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bling[使用道具]
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有可能是支原体污染

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提问楼上的,支原体怎么在镜下看出来?谢谢我也担心这个。很担心,变黄但不是多浑。
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