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标题:[求助]小鼠MSC培养

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发表于 2012-4-13 15:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]小鼠MSC培养



我实验需要做小鼠骨髓间充质干细胞培养，不过自己老是养不好，我用的是BALB/C小鼠胫腓骨全骨髓直接贴壁培养，用的培养基是ＧＩＢＣＯ　低糖ＤＭＥＭ+10%胎牛血清，请问大家我现在用的培养基有另外的要求的吗？细胞原代很难长满瓶。
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orangecake[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
貌似小鼠的BMSC挺容易老的，我的培养条件和你一样，原代出来细胞并不是文献中报道的典型的纺锤形，而是带有一两个突起的长三角形，老化？？另外，做这个细胞有两个小体会，莫在冰上解剖肌肉，我曾因为想标准化自己的实验步骤，按照书本要求冰上取材，结果连续一个月原代没长出细胞。其二，如果取材速度比较慢，温度又高，骨髓冲出来铁定凝结了，我一般把冲洗液全部收集，不过滤，直接在离心管中吹打，直到没有肉眼可见的固体或者说絮状物。貌似这样效果比较好，接种后显微镜下一过，全是均匀的单细胞，应该是可以挽回不少的BMSC。另外，有战友说骨垢端的BMSC更多，我不是很赞同这个观点，原因是他们没有拿出有足够说服力的证据或者文献。倒是有骨垢端造血系干细胞丰富这一说法是属实的。所以还是自在体会好了。我现在没有再养这个细胞了，可以体会你的痛苦，没有经验可以交流，只能精神上支持了，最后赠图两张，做为参考吧，欢迎战友拍砖，我也好学习学习。


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orangecake[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
以上是6D，一下是，希望有经验的战友可以给点意见。


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发表于 2012-4-13 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看你的图片我样的MSC有点跟你这个像，不过长不满瓶的，养了好多瓶终于有一瓶可以传代的了，不过传代后养了三天就全部死掉了。我现在就卡在这里了，这个细胞养不好下面的实验都做不下去了。
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831226[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养过小鼠骨髓基质干细胞的，养的时间不太长，个人积攒的一点小小的经验，谨供参考！一般我取2-3只小鼠的胫腓骨培养的一个培养皿里面，大约一周至十天左右就能形成很大的集落，细胞多的时候可以长满整个培养皿，细胞少的时候不一定让他长满整个培养皿，只要集落已经很大了，集落中心细胞很密集就可以传代了。形成的就是上面图片里面的样子！（我当时没有牌照，所以没有相片可以提供给你们参考）！我用的培养液和你的一模一样！一般我可以养到第三代，到了第三代之后就不是很好了！传代的时候我觉得小鼠的基质干比大鼠难消化，所以我一般消化1分半到2分钟
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HPLC使者[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

想问下小鼠的MSC去买个人家已经养好的细胞系怎么样啊？有没有有用过，给点建议，谢谢。
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议你把骨髓取出后加肝素抗凝，然后PBS吹碎，percoll液离心分层分离，那样效果好点，我养过兔子的MSC，还是很好养的，而且这样做细胞很多，20个小时后换液，血细胞都没有了，就看见呈细丝状的贴壁MSCs，下图就是我首次换液后的图片。


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发表于 2012-4-13 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有就是原代细胞取出后前三四天不要动它，因为骨髓基质干细胞贴壁比较困难，动了之后就不容易贴壁了，一般第四天首次移动并换液！我没做过细胞系
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发表于 2012-4-13 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我现在做实验的这个实验室有人养SD大鼠的骨髓间充质干细胞，不过大家都试着养小鼠的。小鼠的MSC确实很难养，很多时候就是不长，传了代后也不贴壁了。大鼠和兔子的，人的就比较容易养的。现在另外几个用MSC都改成大鼠MSC了，不过我的实验要求不能把小鼠的改为大鼠的。
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ffooll[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在做实验的这个实验室有人养SD大鼠的骨髓间充质干细胞，不过大家都试着养小鼠的。小鼠的MSC确实很难养，很多时候就是不长，传了代后也不贴壁了。大鼠和兔子的，人的就比较容易养的。现在另外几个用MSC都改成大鼠MSC了，不过我的实验要求不能把小鼠的改为大鼠的。

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请问你们实验室有做大鼠骨髓基质干细胞成骨诱导分化的吗？
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