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标题:[求助]请教怎样可以均匀接种96孔板啊？

jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请教怎样可以均匀接种96孔板啊？




最近在细胞接板做MTT，前一天接板，接板后从显微镜里看是分布均匀的，但第二天拿出来看的时候发现大部分细胞都密集在孔板的中间，而四周的细胞数量很少哦，请教下各位怎样才可以让细胞在孔板里均匀啊？（不管我接96孔板还是24孔板和6孔板总是会出现相同的现象）
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发表于 2012-4-13 15:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同感。是用移液枪加液时涡旋造成的。减少加液次数会好些，也即一次就将培养基加够，不要补加。
再者，细胞原液要吹匀，最好保持晃动。原液中的细胞密度不宜过大，必然移液量稍有差异就会造成孔间细胞数量不均匀。
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发表于 2012-4-13 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同感。是用移液枪加液时涡旋造成的。减少加液次数会好些，也即一次就将培养基加够，不要补加。
再者，细胞原液要吹匀，最好保持晃动。原液中的细胞密度不宜过大，必然移液量稍有差异就会造成孔间细胞数量不均匀。

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涡旋造成？我一般都是一次将培养基加够啊！是一个孔板里中间和四周的细胞分布不均匀，不是板间的细胞数不均匀。
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u234[使用道具]
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 小中大
涡旋造成？我一般都是一次将培养基加够啊！是一个孔板里中间和四周的细胞分布不均匀，不是板间的细胞数不均匀。

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对，加样的时候尽量别产生漩涡。
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skytree[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是加完以后，用力晃了几下，只需轻轻上下左右晃动几下就可以。
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发表于 2012-4-13 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加完后，轻轻拍打96孔板，然后室温下放置10min，然后在放入培养箱中。
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同感，另外，加的时候慢一些。
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发表于 2012-4-13 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加完后不要振荡96孔板，这样会把细胞聚集中间。但是假如已经聚集了用力振96孔板也能把细胞震开。我试过
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、用排枪加，不要太快，中速即可。

2、加的过程中，每加3排细胞时晃动一下装有细胞悬液的器皿，防止细胞在未加到板子上时就沉底了（重要）。

3、加完细胞后不要做任何拍打96空板的操作，直接慢慢平移到培养箱内即可。

4、以后换液或加药时，枪头不要抵触到孔的底部，加到侧壁即可。

5、种细胞时横排接种，加药时纵向加药，这样可以有效的避免因接种细胞不均匀造成的误差。
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
5、种细胞时横排接种，加药时纵向加药，这样可以有效的避免因接种细胞不均匀造成的误差。

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觉得这位群友说的这一点值得借鉴！嘿嘿
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