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标题:[求助]激素干预细胞 血清饥饿的问题

ALALA[使用道具]
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发表于 2012-4-14 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]激素干预细胞 血清饥饿的问题



一般情况下，外源性细胞因子、激素干预细胞，需要在细胞在无血清状态下干预吗？
假设可以在完全培养基（10％FBS）情况下干预，我担心血清中的因子会干扰外源细胞因子的刺激效果
比如我是做luciferase 观察启动子活性 ，我加入一个外源激素来干预，该激素能刺激糖皮质激素受体入核 我是在完全培养基情况下加入该激素 还是在无血清状态下加入该激素呢

请指教
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发表于 2012-4-14 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果你转染后1天多再加激素，也算饥饿了吧
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发表于 2012-4-14 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我一般是带血清转染的 基本上（我用的的转染试剂不需要无血清转染） 所以没有饥饿过程
顶起来 继续讨论
加入外源因子干预细胞 是否必要饥饿一下呢
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发表于 2012-4-14 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想
如果你用hela or cos7等体系做luciferase，可以不用饥饿
如果你用你检测WB,mRNA,ChIP的体系，应该参照这些体系，这时有必要饥饿
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发表于 2012-4-14 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想
如果你用hela or cos7等体系做luciferase，可以不用饥饿

——————————————————————————————————————————

请问，能说明理由吗？为什么上面2种细胞不用serum starve？因为我们也用过cos7细胞。
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发表于 2012-4-14 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果你用你检测WB,mRNA,ChIP的体系，应该参照这些体系，这时有必要饥饿

————————————————

同上，能说明理由吗？
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发表于 2012-4-14 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
般情况下，外源性细胞因子、激素干预细胞，需要在细胞在无血清状态下干预吗？
假设可以在完全培养基（10％FBS）情况下干预，我担心血清中的因子会干扰外源细胞因子的刺激效果
比如我是做luciferase 观察启动子活性 ，我加入一个外源激素来干预，该激素能刺激糖皮质激素受体入核 我是在完全培养基情况下加入该激素 还是在无血清状态下加入该激素呢

请指教

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在不能确定血清中是否含有可以同样启动目的启动子的因素之前，是否serum srave的好一些？
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发表于 2012-4-14 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问，能说明理由吗？为什么上面2种细胞不用serum starve？因为我们也用过cos7细胞。

同上，能说明理由吗？

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你能用hela or cos7，说明在这些体系里你的转录因子内源性表达很低，或干脆无表达，否则你无从证实你的因子参与luc转录,除非你用dominant nagetive mutant。如果这样，说明你的刺激激素在血清里很少，否则转录因子该内源性高表达。所以我认为无需饥饿。

然后，在你的ｗｂ，ｃｈｉｐ，ｍＲＮＡ体系里，你的转录因子肯定内源性高表达，说明你的刺激激素在血清里是必须的，所以必须饥饿

请各位发表高见
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发表于 2012-4-14 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我倒是觉得，还是看目的启动子。

如果能够确定目的基因的启动子在有血清的情况下跟你希望考察的转录因子结合的话，就有必要starve。所以，首先看看其他人有没有报导，关于你的目的基因的启动子在纯血清的条件下是否被激活。如果没有，最好做一个对照，在单纯血清条件下跑一次看看，虽然有点麻烦。

一般情况下在只有血清的条件下，启动子被启动的不多见，但是得看具体情况--这句话是我们组另一个经常做luciferase的人说的。
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ALALA[使用道具]
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发表于 2012-4-14 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果不考虑血清中含有与启动子转录活性有关的因子影响，是否需要饥饿呢？
我担心的是：在血清中存在多种因子包括一些大的蛋白，当我加入外源细胞因子干预时，由于血清中一些因子和大的蛋白贴附在细胞膜上，导致我加入的外源细胞因子无法与膜受体“充分”结合，从而干扰了所加入外源细胞因子的真实效应。
如果需要在饥饿状态下加入外源性细胞因子，则同样存在担心：饥饿状态下，细胞生长状态受到很大影响，加入外源细胞因子干预后，由于细胞生长状态近乎停滞，导致我所加入的外源细胞因子产生的作用被大大削弱。

请高手明示，或者将自己的一些转染及其后续的干预的条件（重点是血清的饥饿与否）贴上来，以便参考
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