[求助]细胞再次污染？

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标题:[求助]细胞再次污染？

moonlight45[使用道具]
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发表于 2012-4-17 18:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我养细胞一个月，第一次细胞因为细菌污染全部死了，后来调整了方案，把培养箱和仪器全部消毒，新购来所有液体（HYCLONE的DMEM高糖培养基，天津颢洋公司的胎牛血清，GIBCO的胰梅过滤分装）从别人那里拿回来了一瓶细胞，状态也不是很好，拿来的时候有很多颗粒，瓶子很满很挤，于是就传了两瓶，大概有10多天，一直就这样传代养有十多瓶了，细胞生长比较慢，颗粒很多，背景有很多黑色小颗粒，总体感觉灰头土脸的，以为是营养不好，加大了血清浓度到20％（开始是10％），但是细胞还是不见好转，有时传代一天后可以见到贴壁，2第2天，3天就有可能漂浮死掉，颜色变黄不混浊，肉眼见有漂浮物！和以前细菌污染还是有不同！
有时候培养基两天不换就有变黄，但是实际瓶子里面的细胞不多，按理来说不应该是细胞营养不够的代谢产物啊！一直在想是不是消化过了，造成细胞损伤，或者是细胞本身就不好！看到有文献说有可能是支原体污染！现在都一直有点迷惑！请各位指点1

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2012-4-17 18:43

40936419.jpg (24.61 KB)

moonlight45[使用道具]
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发表于 2012-4-17 18:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

上面的图片是传代之后第2天的，感觉细胞贴的不均匀，这是密度高的地方，而且细胞尖尖的，没有伸展开来，这有张三天之后长的算比较好的状态的图片

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2012-4-17 18:43

14706022.jpg (36.74 KB)

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发表于 2012-4-17 18:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

下面这张是死的细胞图片
可见成团的细胞

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2012-4-17 18:44

36313012.jpg (37.05 KB)

moonlight45[使用道具]
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发表于 2012-4-17 18:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

下面还有几张图片都是长不好看的

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2012-4-17 18:44

37438957.jpg (32.82 KB)

moonlight45[使用道具]
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发表于 2012-4-17 18:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

还有一张
请各位帮我分析下

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2012-4-17 18:44

89121821.jpg (32.82 KB)

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发表于 2012-4-17 18:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这有点偶尔长的好一点可以传代的细胞，是密集部分的，但是往往一瓶细胞里面长不均匀的，有些地方没有细胞，有些地方就挤很多了，感觉要死了一样，而且长密度的地方都是瓶子边缘，是不是因为边缘吹打不到啊！

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2012-4-17 18:45

28104492.jpg (32.62 KB)

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发表于 2012-4-17 18:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

现在即使细胞贴了也可以看到一些死的细胞贴在活细胞上面，再过几天就有死掉的可能！
真不知道是什么原因？我胰酶用的是0.25％加上0.02％一般我一分钟就终止消化了，因为有些稀的地方细胞都成团了，而密集的地方在显微镜底下虽然没有很明显变圆，但是只有吹打还是可以打下来，只是有些边缘死角受力不到也还是和没有消化时候一样！请问怎么可以避免细胞长不均匀，然后可以做到消化的时候不会使细胞成团漂浮（和上图死细胞一样成团漂着一样，我觉得是消化过度了，请问对？

yychen[使用道具]
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发表于 2012-4-17 18:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1.有一种感觉，你传代的时候吹打不够，可以尝试轻柔吹打80-100下，使细胞分布更均匀点。
2.还有你发的那张细胞团，不一定就是死翘翘的细胞，很像刚刚消化下来的未打散的细胞团。
3.至于边缘细胞多一点，这是正常的，悬浮的细胞有个“边缘效应”，就像池塘里的浮萍在岸旁比较多一样。

nn255[使用道具]
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发表于 2012-4-17 18:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

兄弟，你养的是不是sh细胞，培养基两天就变黄了确实有点快，搞不好还是污染，不知道你的培养基再用之前有没有做一下培养，培养一下看看，还有如果想细胞长的均匀，再放入培养箱之前轻柔的水平摇几下，应该没问题，边缘比较密属于正常现象。希望能对你有帮助。

moonlight45[使用道具]
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小中大

我养的是脐内皮细胞，养之前有培养基做鉴定的！3天都挺亮的！

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