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标题:[求助]细胞出现匪夷所思的污染,有高手能帮忙分析一下吗?

33号[使用道具]
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[求助]细胞出现匪夷所思的污染,有高手能帮忙分析一下吗?



之前一直养得很好的L6大鼠成肌细胞发生了怪事。刚复苏的时候还好,可是第二次传代24h后,培养皿中总有那么集中的一两块空白区域没有细胞贴壁(若是污染,为什么其它地方有贴壁较好?而且换了其他品牌的平皿、孔板,都是这样),该区域周围的细胞变圆,或者是变得形态怪异、看了都觉得恶心。细胞生长明显滞缓,培养液颜色正常、清亮,背景比较干净,看不出明显污染,偶尔有几个比细胞明显小的亮圆点。另外,变圆的细胞周围似乎有小颗粒包围,如果继续培养,细胞继续变圆,飘起,死亡,而且也是集中一片一片的死。会不会是支原体呢?郁闷中。


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再贴一张放大的


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这张中,黑色箭头是比较正常的梭形形态。红色箭头处细胞形态变化,伸出触角一般。黄色箭头处细胞变扁,很难看。桃红色箭头处显示死细胞周围似乎有东西。蓝色箭头处是一些小的亮圆点。


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66小飞侠[使用道具]
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如果找不出原因的话可能是你的血清不适合你的细胞,换个血清试试,有的细胞认血清
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rxcc33[使用道具]
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细胞培养小技巧2---诡异的“划痕”

问题描述:

有一次观察心肌细胞的时候突然发现瓶底出现些许“鸿沟”--形状规则,长短不一的“空白区域”,该区域寸细胞不生,而且区域两侧的细胞搏动频率也不相同。

当时心下大惊:怎么回事,昨天观察还没有这些问题的。

第二天再次观察,发现居然有部分细胞了,却不见跳动。

第三天,该区域细胞增多,不跳。

陷入沉思,却百思不得其解……

猜测原因:

始终有意识的记着这个事,终于发现,原来是在换液的时候,不小心吸管的尖端,触到了瓶底,硬生生的将细胞刮掉了。于是出现了空白区域,原来是被自己硬生生划出来的,这样两侧的细胞就失去了联系,搏动就不同步了。置于又出现的细胞可能是增生的成纤维细胞了

猜测是否正确,悬疑正在继续。

水落石出

于是在以后的操作中,坚决不接触瓶底,空白区域消失。至此,水落石出,划痕事件结束,一切都是操作不注意惹的祸。(虽然有时候还是不能避免,但是比以前少多了)

经验总结:细胞操作是一个精细活,虽然千虑,但总有一失。遇到这种情况,一定不要放过,至少有意识的记下来,想着去解决,这样才一点一滴的积累经验,一点一滴的进步!!

从别处帖子看来的 不知道是否跟你的问题一致。我是新手,还没进实验室,很可能出错,请仔细鉴定。
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qumm1985[使用道具]
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我想应该不太像是ls所说的这种情况!呵呵
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HP007[使用道具]
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我想也不应该是楼上的楼上说的那种情况,分析来看的话,按楼主的意思,该特殊区域的细胞和正常区域的细胞形态上都有很大区别,可能有两种原因可以解释
一、该区域有少量细菌污染源,抑制了正常细胞的生长,所以造成空白区域,而且与周围细胞形态都不一样
二、该区域由于细胞传代时吹得不均匀,细胞分布也不均匀,造成局部地区细胞绝对数量偏少,细胞生长受到接触抑制,因而张的少

具体鉴别的方法,楼主需要搞清楚,该细胞在生长幼期和老化期有什么区别。
本人认为既然楼主大细胞大部分生长旺盛,应该不用太担心,传代一两次可避免。
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yhz1973[使用道具]
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我换液的时候,液体滴下去的部位把细胞都冲走了,那一片就不长的

不过我是做神经细胞,不知道LZ这个是不是
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我想也不应该是楼上的楼上说的那种情况,分析来看的话,按楼主的意思,该特殊区域的细胞和正常区域的细胞形态上都有很大区别,可能有两种原因可以解释
一、该区域有少量细菌污染源,抑制了正常细胞的生长,所以造成空白区域,而且与周围细胞形态都不一样
二、该区域由于细胞传代时吹得不均匀,细胞分布也不均匀,造成局部地区细胞绝对数量偏少,细胞生长受到接触抑制,因而张的少

具体鉴别的方法,楼主需要搞清楚,该细胞在生长幼期和老化期有什么区别。
本人认为既然楼主大细胞大部分生长旺盛,应该不用太担心,传代一两次可避免。

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首先,谢谢大家的帮助!!我养这个细胞的时间比较久了,首次遇到这个情况。一两个月前养的同一批冻存的细胞都很好。
我想不是传代的问题,因为别人用了我分给她的细胞,传代后,也出现同样的情况,而且似乎更严重,大片的区域只有变圆的较稀疏的细胞分布,细胞慢慢死亡,换了人操作,也换了培养基,结果一样,所以怀疑更像污染。
最近又复苏了一次,东西除了血清(新买的),都换了新的,培养箱也灭菌处理了,结果还是难逃恶运。所以现在很怀疑新用的这批血清,品牌种类和之前一样,还是某进口品牌(H牌)的特级胎牛血清。昨天问别人要了一瓶他们的同种血清,又复苏了一次,不知结果如何,等两天就知道了,额的神啊~
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duoduo[使用道具]
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你不妨换个培养基,换个进口血清,我们一直用百分之十PAA血清,HYCLONE的DMEM养的细胞特别好
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