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标题:[求助]HUVEC细胞贴壁后成片脱落!？

hustwb[使用道具]
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发表于 2012-4-26 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]HUVEC细胞贴壁后成片脱落!？



最近养了HUVEC细胞 起初细胞状态很好 长得也快 2-3天就要传代 我用的是低糖DMEM培基（未加双抗）+10%四季青胎牛血清 可就在前几天一次传代后 很多瓶细胞莫名奇妙的浑浊 开始我以为是细菌污染 仔细观察后 发现看不到明显的细菌样颗粒 瓶中漂浮的都是成片脱落的死细胞 我传代后一般不离心 第二天换液 以前几次都很好 询问了细胞培养的老师后说让我干脆消化了 重新分瓶 今天试了一下 中午的传的 下午就有很多细胞贴壁了 并且长出了形态 但是明天是不是又会历史重演呢？ 今天忘了照几张照片 明天奉上 请各位高手指点 如果有人曾遇到类似情况 请指点
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-4-26 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 hustwb 的帖子

呃，你用gelatin铺板了没？
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hustwb[使用道具]
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发表于 2012-4-26 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是一次性的培养瓶啊 今天消化了一瓶 分种到新的培养瓶中 好像还行 图片照了 可惜忘了从实验室拷回家 不能上传了 只能等到周一 可是细胞的状态不好 用我同学的话说就是一副营养不良的样子 ，而且今天看的时候，在不长细胞的空白处，还有很多黑色颗粒，很小，固定不动，细胞长得密的地方就少，稀的地方较多。
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-4-26 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一次性培养瓶在养HUVEC细胞之前要先用灭过菌的0.1%的gelatin铺板半小时，然后去用来养细胞，否则贴壁不好。
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-4-26 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
脐静脉内皮细胞不是应该用1640培养基吗？
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发表于 2012-4-26 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

给我细胞的同学说是用低糖的DMEM养，后来查了一下文献，发现用1640养的也挺多，大致各占50%左右 不过同实验室有人是用1640养的，细胞状态是比较好，难道是培基的原因？我是不是要考虑换培基呢？我从她那要了点细胞用我的培基养养，看看结果如何
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hustwb[使用道具]
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发表于 2012-4-26 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢，我以为只有玻璃瓶才需要用明胶铺板，不是说一次性瓶子是已经经过处理的吗 含有利于细胞贴壁的物质
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-4-26 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

HUVEC我试过用1640,DMEM-L，M199，F12四种培养基，都是用的10%的四季青胎牛血清。个人感觉细胞生长状态都不受影响，就是在更换不同培养基的第一次，细胞适应的慢一些，有部分漂浮细胞，第二次换液就没问题了。
还有一个区别就是不同血清细胞生长的形态还是有所差距，查询了一下，ATCC建议采用F12培养基培养HUVEC，我觉得M199和F12这两种培养基培养，细胞状态是最好的。
对于铺胶的问题，我觉得倒是没有必要，如果是元代培养，可能有一定帮助，但是细胞系完全没有必要，我用玻璃瓶培养的，细胞贴壁一直很好！
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-4-26 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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发表于 2012-4-26 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的M199培养基,
需要添加heparin和ECGS.
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