[求助]tube formation assays 不见管腔结构？

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标题:[求助]tube formation assays 不见管腔结构？

bamboo16[使用道具]
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发表于 2012-4-27 13:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位，我用的sigma公司的ECM胶，原浓度及稀释1备各用过一次，30000细胞/well，96孔板。培养期间只观察到球状的聚团结构，未发现明显的管状结构。培养时间延长至24，48仍未见管腔，只见球状。请问这个问题是如何解决，原因何在？

附件

2012-4-27 13:21

11200545.snap.jpg (20.3 KB)

duoduo[使用道具]
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发表于 2012-4-27 13:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #1 bamboo16 的帖子

胶凝固了么？
你用什么细胞做的？

bamboo16[使用道具]
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发表于 2012-4-27 13:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

多谢楼上回复。
我用的HUVEC细胞株，以前实验室的师姐们留下来的，估计代数已经很多了。
胶应该是凝了，我在培养箱放置了20多分钟后，拿出来，倾斜96孔板，发现已经不是液体了。
烦请大家给找找原因。本来想年前把这个试验给结束来着，现在看来有些紧张了。

flower-201[使用道具]
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发表于 2012-4-27 13:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

将细胞数量加大到80000/well甚至更多，肯定能形成

remenb[使用道具]
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发表于 2012-4-27 13:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

其实上面视野的左上方已经有部分细胞出现管腔样结构了，可以看到有个别细胞伸出突起，呈成纤维细胞样。再优化一下没问题。

is2011[使用道具]
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发表于 2012-4-27 13:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你可以在24孔板里培养，用matrigel，，在四度冰箱里过夜，（注意放在有冰的盒子里），每个孔100ul，在培养箱里放置30min，然后拿出来接种细胞，接种细胞的数量很关键，自己最好摸一下，大约在5万左右，不能太多也不能太少，太多的话细胞会堆在一块，太少的话，根本成不了官腔状。祝你成功！

bamboo16[使用道具]
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发表于 2012-4-27 13:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢各位。等我复苏细胞重新再做！

nn255[使用道具]
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发表于 2012-4-27 13:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

能否形成小管和细胞的状态以及细胞的接种密度直接相关。我们实验室用48-well plate，matrigel （BD公司）100ul/well, 细胞接种20000个/well，一直都没问题。至于细胞的状态，就需要你自己根据实际情况判断了。

bamboo16[使用道具]
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发表于 2012-4-27 13:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

多谢！
看来我的细胞密度有些大哈，我再适当减少一下。
另外，问一个比较弱的问题，这个状态好想不是很好确定啊。以前做的试验，显微镜下感觉细胞状态没有明显的异常。

skytree[使用道具]
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发表于 2012-4-27 13:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

和楼主出现一样的问题，发几张图片上来大家一起讨论！
2h 已成管雏形
6h 细胞聚集

附件

2012-4-27 13:41

44891192.snap.jpg (23.71 KB)

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