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标题:[求助]转染后的细胞

gmjghh[使用道具]
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发表于 2012-4-29 09:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]转染后的细胞




这是我转染后的细胞，一个多月了，怎么状态一直这样呢，
还有板子上的杂质是细胞碎片？怎么去除啊？我就一克隆，直接消化了，可能把原来板子里的碎片一直传下来了，怎么办呢？望指教


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发表于 2012-4-29 09:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我怎么感觉背景杂质是微生物污染呢？细胞碎片的话换个液一般就没有了啊。
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发表于 2012-4-29 09:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 131415 于 2012-4-29 09:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我怎么感觉背景杂质是微生物污染呢？细胞碎片的话换个液一般就没有了啊。

有什么办法处理吗？
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发表于 2012-4-29 09:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

补充一句，我没看到培养基中有漂浮的东西啊，而且最近改用的GIBCO血清，也不应该有沉淀啊
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发表于 2012-4-29 09:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 gmjghh 的帖子

我也觉得像污染了~~~~~~~~~~~~~~~~
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发表于 2012-4-29 09:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞在状态不好的情况下，会分泌像照片里面的黑色物质。

你在　高倍数显微镜下，仔细看一看，黑色物质运动状态如何。

单一的　布朗运动，那是最好了，，要是发现其他剧烈运动，怀疑污染的可能性大。

还有，你用的是不是　CaCl2. 2X HBSS,作的转染阿。

以上两种物质，跟DNA形成complex也会导致照片里的黑色点点。。

祝好！！
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发表于 2012-4-29 09:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的是脂质体2000转染，中间用的是opti-men培养基，
黑色物质基本上是贴壁的，我消化的时候吹打劲小的话，就很少打下来，培养基中在第三天倒是有些悬浊的东西，但是不怎么运动，应该算是布朗运动了。
我是10cm大皿转染，转然后没有传代，直接在里面加药筛选，这样绝大部分细胞都死了，皿底部也不甚干净，一直传代下来，就成这样了。
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发表于 2012-4-29 09:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #7 gmjghh 的帖子

你用的是 什么细胞阿？？

是 293T细胞么？？
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gmjghh[使用道具]
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发表于 2012-4-29 09:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #8 hot_hot_hot 的帖子

我用的是前列腺癌细胞株，师兄转过也没出现过这个情况，是没转进去？今天问了实验室的一个师姐，她说可能是G418引起的，但一般不会影响细胞状态，现在很郁闷，难道只能重新来过？
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发表于 2012-4-29 09:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你片子里的细胞是你传代得到的吗？看这张照片的样子感觉像是污染了。如果是污染的话，那些黑色的物质会大量增殖，且细胞会在24到48小时之内飘浮，死亡。
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