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标题:[求助]PBMC能否冻存？

lagua123[使用道具]
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发表于 2012-4-29 09:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]PBMC能否冻存？



请教各位群友，本人想采集PBMC，然后还想检测PBMC亚群的功能；若每次都是提取后即可做关于功能的实验，这样的效果是公认的，但是工作量确是相当大，因此想能否将PBMC提取后冻存起来，然后集中一起做细胞功能的检测？能这样做么？会影响细胞表面标记么?会影响细胞的功能么？请战友们赐教！若可以，请提供相应的解决方案，谢谢！
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glass[使用道具]
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发表于 2012-4-29 09:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
SCI关于淋巴细胞功能检测如流式，细胞因子检测等都是先冻起来然后一起搞的
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lagua123[使用道具]
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发表于 2012-4-29 09:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢楼上群友的支持，能提供相关文献么？好拜读啊！
但是低温冻存应该是会损伤细胞的啊，数量、表型及功能的，这样能反映真实情况么？
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-4-29 09:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PUBMED上面搜索
PBMC
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-4-29 10:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PBMC是可以冻存起来一起检测的，国外有一家叫做CTL的公司买这种冻存液，号称复苏率达到8、90，但我用含10%的DMSO的纯血清冻存PBMC，也能达到70-80%的复活率，并且其分泌细胞因子的能力没有发生改变。冻存PBMC的关键在于恒定速度来降低温度至负80度。方法如下：
1 预先配置20%的DMSO，4度预冷，包括即将使用的冻存管
2 收获PBMC细胞，纯血清重悬PBMC。细胞浓度最好是2×107
3 逐滴加入等体积20%的DMSO，混匀
4 将冻存管放于塑料泡沫盒中（装15ml离心管的那种），外面用保鲜袋扎紧，放于-80度冰箱中，过夜。而后转移至液氮中冻存即可。
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发表于 2012-4-29 10:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

当然，冻存的PBMC的复苏步骤与普通的细胞有所不同，步骤如下
1 取出冻存管，37度水浴解冻
2 用移液管将将冻存管中的细胞转移至15ml离心管中
3 逐滴加入5倍于冻存液体积的培养液（预先平衡好），边加边混匀，这一步主要是为防止PBMC的渗透压变化太大，导致细胞破裂或损伤
4 再加入5倍体积的培养液，混匀，离心
5 重悬细胞后，再加入10ml培养基洗涤一次。
6 计数，进行试验。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2012-4-29 10:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
能提供相应的文献支持么，最好是国外的？谢谢！
哪家公司叫具体叫什么名字？很难搜索到啊
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toy[使用道具]
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发表于 2012-4-29 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是两篇关于PBMC冻存的文献
Gebauer, B.S., D.E. Hricik, A. Atallah, K. Bryan, J. Riley, M. Tary-Lehmann, N.S. Greenspan, B.O. Boehm, B.J. Hering and P.S. Heeger. 2002. Evolution of the Enzyme-Linked Immunosorbent Spot Assay for Post-Transplant Alloreactivity as a Potentially Useful Immune Monitoring Tool. The American Journal of Transplantation. 9: 857-866.

Kreher, C.R., M.T. Dittrich, R. Guerkov, B.O. Boehm and M. Tary-Lehmann M. 2003. CD4+ and CD8+ cells in cryopreserved human PBMC maintain full functionality in cytokine ELISPOT assays. J. Immunol. Methods. 278: 79-93.
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