小中大HepG2用lipo2000在我们实验室做的转染效率很高的,可以到70-80%,不必担心。不需要用电转,磷酸钙法也可以有40-50%的
操作上主要注意:
1,细胞铺板时的状态很重要,应该在铺板前尽量消化为单细胞悬液,trypsin+EDTA充分吹打即可
2,转染前1天铺板,待转染时密度刚好达到80-90%,不能太低,但是也不能长过(细胞成团,堆积)。最好是刚刚长满,此时还在对数生长期
3,加入的质粒要去除内毒素,plasmid:lipo约为1:0.5-1:5。实际上采用说明书的推荐量就很好,1:2.5
4,用前自己好好看一遍说明书,哈哈
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,转染前1天铺板,待转染时密度刚好达到80-90%
我也在做这个细胞,10cm 板, 1ml Trypsin+1ml Medium.取150ul接到6-well-plate (2 ml), 达到80%须4天。能否介绍一下你是怎么做的,解解了先。