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标题:[求助]血清饥饿法的具体步骤是什么啊！

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发表于 2012-4-29 13:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]血清饥饿法的具体步骤是什么啊！




如题，请高手帮忙，科研菜鸟不胜感激！
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发表于 2012-4-29 13:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

自己已经解决，拿出来与大家分享，希望对同样需要的朋友有帮助。
可采用血清饥饿法得到G0期细胞：

1．取处于对数生长期的细胞。

2．用含0．5％　-　1％小牛血清的培养基培养细胞48－72 h。或用无血清的培养基培养24 h。

3．用0．1％ - 0．25％胰蛋白酶消化细胞可收获G0期细胞，可用’H-TdR掺人进行测量鉴定。
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发表于 2012-4-29 13:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
问高手一下，是贴壁后再用无血清的培养基培养呢还是直接就用无血清的培养基使细胞贴壁呢？
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2012-4-29 13:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

贴壁后更换无血清培养液。

直接用无血清培养液，细胞不容易贴壁。
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发表于 2012-4-29 13:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
贴壁后更换无血清培养液。

直接用无血清培养液，细胞不容易贴壁。

————————————————————————————————————————————————————————————————

我是检测药物对MAPK通路的作用的，血清中的某些成分可以激活MAPK通路，如果用含有血清的培养基使细胞贴壁，不知道会不会影响实验结果呢？理论来讲根本不应该让细胞接触血清，但是不用血清养细胞，能养活吗？迷茫中，请指点！不胜感激！
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2012-4-29 13:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先，有血清培养液培养细胞；
然后，分瓶或者埋板，也还是使用有血清培养液；
接着，等12~24细胞贴壁之后，更换无血清培养液，培养过夜，去除血清的影响；
最后，更换成含药物的无血清培养液。

这样做就不会影响你的考察目的。
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发表于 2012-4-29 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请高手指点，因为我要先用脂多糖来刺激细胞激活炎症通路，造成炎症细胞模型，然后再加药观察药物的效果，也就是说要设以下分组
1.正常培养的细胞，通路未被激活
2.脂多糖刺激的细胞组，脂多糖可以激活炎症通路
3.脂多糖刺激后加药物干预后的细胞组，药物可抑制通路
这样的话，我要考察通路的情况，应该可以检测到第二组的通路是激活的，但是如果血清中的成分本身就可以激活炎症通路，在用含血清的培养基进行细胞贴壁的时候，那么第一组和第二组的通路会不会就没有差别了啊！我自己蒙着头做，没人指点，很迷茫，请高手指点一下！！！谢谢谢谢谢谢！
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发表于 2012-4-29 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
每组细胞都是处于同一种均一情况下,就算血清里有一些成分会影响.但你最后分析三组之间的差别.这个均一因素不会影响你观察药物疗效.
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发表于 2012-4-29 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你这个实验思路和我的差不多 只是指标不一样 我认为虽然血清中有可以影响到MAPK这一通路的可能 但脂多糖这一炎性因子刺激MAPK表达的上调 对比血清对MAPK的影响 应该是有统计学上的意义的 不会没有差别的
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-4-29 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的意思是血清饥饿无需要做，以细胞所需血清浓度的培养基进行试验不会影响到对MAPK通路的检测？我这样理解对吗？
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