[求助]关于流式细胞仪双染时，调补偿单染用 ..

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标题:[求助]关于流式细胞仪双染时，调补偿单染用 ..

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-4-29 16:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用的是BD 的Annexin-v PE、7-AAD双染试剂盒，对应选择FL2和FL3，FSC Voltage选的是E-1，现在的问题是补偿调不好，Annexin-v PE单染细胞与左下象限细胞，以及7-AAD单染细胞与左下象限细胞都分不开，连到一块了，怎么调补偿都分不开，再这样做下去要破产了！向各位战友高手请教一下，哪位好心的战友帮帮忙啊，谢谢了，下面是图：

而且FSC-SSC图中细胞的分布形状，单染和阴性是不一样吗？

阴性

附件

2012-4-29 16:34

76867084.jpg (27.15 KB)

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-4-29 16:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Annexin PE单染

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2012-4-29 16:35

22146377.jpg (28.58 KB)

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-4-29 16:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

7-AAD单染

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2012-4-29 16:35

43908657.jpg (28.96 KB)

duoduo[使用道具]
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发表于 2012-4-29 16:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问你的单染细胞是不是肯定是PE，7-AAD阳性的细胞？只有用这样的细胞才能来调补偿。
你的阴性细胞，也就是不加染料的，应该都在左下角啊。

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-4-29 16:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

总算有群友说话了，谢谢啊
用的胃癌MGC803做细胞凋亡！

阴性细胞应该在左下象限，是说FSC-SSC图吗？这个应该是那样分布的吧？

两幅单染Annexin-v PE的图左下角应该会有那么多细胞吗？都连到一块儿就没法统计细胞数目了吧？怎么能分开呢？

qqq111[使用道具]
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发表于 2012-4-29 16:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

两幅单染Annexin-v PE的图左下角应该会有那么多细胞吗？都连到一块儿就没法统计细胞数目了吧？怎么能分开呢？

左下角有细胞你也很正常啊，你的药物难道100%让细胞凋亡吗，总有个比例的吧。你统计比例就可以了。很简单的。

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-4-29 16:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可最关键的是：两个单染的细胞和阴性细胞调补偿都没分开，这样也可以吗？谢谢

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-4-29 16:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

弱问一下：调补偿用的细胞是用未加药的活细胞，还是用加过药的凋亡细胞。
我用的是凋亡细胞，如果用活细胞，笑话就闹大了

summerxx[使用道具]
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发表于 2012-4-29 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可最关键的是：两个单染的细胞和阴性细胞调补偿都没分开，这样也可以吗？谢谢

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所谓调补偿，是将落入别的通道的荧光扣除掉，以免发生假阳性。方法是做一个阳性对照，就是说这群细胞是肯定能在阳性区的，单染，然后调节补偿按钮，把细胞落在双阳的区域拉下来，就可以了。
我不明白你和阴性的细胞调补偿是什么意思。

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-4-29 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

师弟说，就是用的正常未加药细胞来调试的，说用加药细胞调补偿不可信了，所以自己也拿不定主意，现在糊涂了~~

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