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标题:[求助]六孔板中接种的细胞为什么密度不均？

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发表于 2012-4-29 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]六孔板中接种的细胞为什么密度不均？



最近用六孔板养了一批mMSCs细胞，传代时就发现每个孔中的传代细胞大都集中在中央区域，边缘区域密度较小，吹打后也不见效果。第二天细胞贴壁后，中央区域细胞密度几近100%融合，而周边区域较稀少。到了下午，有数个孔中的中央区域的贴壁细胞呈大片脱离而飘起，不知何故。请有经验的 老师指点一下。谢谢！
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plaa[使用道具]
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发表于 2012-4-29 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

说真的还比较怪！
一般会边缘比中央密，原因：1，边缘效应，2，6孔板中央微凸起。
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remenb[使用道具]
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发表于 2012-4-29 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、铺板后可以摇晃几下，通常上下晃7－8次，停一下待液面静止，左右再晃7－8次，如果不放心，还可以左上右下方向、右上左下方向斜的再晃晃，晃的幅度要大一点，液面至少要到孔壁高度的一半，然后在超净台里静置5－10分钟，再小心地移到培养箱。这招也是园里的高手教的，试了发现效果很好，分享。
2、铺板次数多了，手法好的话，也可以用TIP头匀速放液划Z字型，均匀铺到孔里，不晃，静置数分钟再移到培养箱。
现在发现6孔板是所有板里最好铺的了，呵呵。
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-4-29 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的板可能有问题，一般会边缘比中央密，边缘效应
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发表于 2012-4-29 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位老师的指点，我试试看。有老师分析认为，我的板子可能有问题。可是我在消化的过程中，滴加胰酶时（每孔加胰酶不到0.1ml）发现胰酶液体从滴加液体的孔中央向周边扩散。最后，周边液体明显壁中央区域多。这能说明板子有问题的可能性不大吗？另外，我曾经试着在镜下用载物台快速移动来混匀液体，发现细胞不单没有混匀，反而有向中央移动的趋势。
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any333[使用道具]
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发表于 2012-4-29 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要晃到感觉培液快洒出来了，剧烈一点。晃得温柔确实会堆在中间的。
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发表于 2012-4-29 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以将第一个孔加入少量无血清培养基（血清会起泡沫），晃动浸润整个孔底，然后用移液枪或吸管吸至第二孔，同样方法浸润孔底，其它孔依次类推，这样整个孔底都是湿润的，细胞悬液会平铺在整个孔底，加细胞悬液的时候可以避免加在中间细胞多，周边细胞多中间少的现象，细胞分散较均匀，加完细胞后要放工作台静置一下。
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发表于 2012-4-29 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
减轻边缘效应：先在孔里加适量的培养液，晃动铺满孔底部。关闭风机，用巴士管吸取适量消化好的细胞悬液均匀的滴加在孔里的不同点，盖上盖子，十字形晃动几下，静置10分钟（具体时间可以依据细胞沉降特性定），放入培养箱就可以了。
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orangecake[使用道具]
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发表于 2012-4-29 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加细胞的时候不要只加在中央，因为从枪头打下去的时候细胞就集中在枪头落下的位置。各点均匀加样。如果发现集中在中央，那就用手掌拍打培养板，十字方向。注意拍打的时候不要把培养液拍出来了
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发表于 2012-4-29 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的细胞也是密集在中央呢，下次也试一下。
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