[求助]关于复苏时水浴时间的问题

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标题:[求助]关于复苏时水浴时间的问题

白白的[使用道具]
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发表于 2012-5-2 12:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

小弟最近在做复苏，很奇怪，37度水浴1分钟不能完全化冻，2ml的冻存管里还有很大的冰块……请问各位大侠，这样的情况怎么解决？还有水浴的时候刚放进去会冒出一个很大的气泡，是不是漏水了？还是由于冻存管里面气体受热膨胀，冒出来，这样的话，不也就漏水了吗？
小弟很纠结，这样的问题该如何解决？谢谢！

fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-5-2 12:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

取出冻存管直接投入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

guagua[使用道具]
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发表于 2012-5-2 12:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

水浴的时候刚放进去会冒出气泡是由于冻存管里面气体受热膨胀冒出来的，我的经验是复苏时将水温调至39度，因为将冻存管放进去时水温下降很快，37度水温会降的很低。37度水浴1分钟不能完全化冻，2ml的冻存管里还有很大的冰块，原因还可能是冻存液中FBS浓度大。

DDD[使用道具]
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发表于 2012-5-2 12:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也是啊，从来没有做出过书上写的那种一分钟就可以全部融掉的过程。不过我觉得没有什么的，复苏尽量缩短时间是为了避免低温对细胞造成的损害，也同意楼上说的融化时间过长可能是血清浓度偏高所致。没有融化彻底就继续水浴呗。我现在复苏有时水浴两三分钟，细胞生长起来还是好好的

bananapeople[使用道具]
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发表于 2012-5-2 12:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

将刚从液氮里取出的冻存管盖拧松，缓冲气压，再拧紧，放入37℃水浴摇晃尽快解冻，气泡较小。

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2012-5-2 12:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

对于细胞复苏，我说下我的看法：
1、我们实验室用的也是用2ml的冻存管，冻存时冻存管不要将液体加的太满，加到螺纹就可以了。
道理很简单，因为液体变固体体积会增大。旋上盖子后我们加上一层布胶带，做上标记。存-20度2小时左右，转到-80度冰箱。
2、复苏时，我们实验室不用水浴锅，取500ml烧杯接热水，加冷水调水温到37到39度，一人从液氮里取出的冻存管立即放入烧杯，另外一人拿住冻存管快速在温水摇动（重要），一般2分钟内会全部解冻，不会出现大块的冰。
冒气泡我同意楼上的说法。不会影响细胞复苏。
3、还有离心时速度、时间要注意，像我们实验室一般是1000转5分钟。每个实验室离心机不同，细胞类型不同，从而离心速度、时间不同。
望战友相互交流。谢谢

TNT[使用道具]
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发表于 2012-5-2 12:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不过有刚复苏的细胞不去离心，第二天再换液，细胞也没什么影响

mamamiya[使用道具]
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发表于 2012-5-2 12:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的每只2ml的冻存管只装1ml冻存液，取出直接投入38℃水浴箱中，并连续摇动，一般可以在1分钟左右完全融化。

okhaha[使用道具]
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