[求助]质粒提取疑问

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标题:[求助]质粒提取疑问

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我提取的空质粒跑电泳位置不对，重新转化提取仍然不对，不知哪里有问题，请高手指教，谢谢！

yychen[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你对什么跑的电泳？
对质粒跑电泳意义不大，单/双酶切以后电泳更有意义

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #2 yychen 的帖子

您的意思是以线性的质粒为准看分子量吗？

yychen[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #3 zwsyrt 的帖子

看线性质粒长度，或者特定长度酶切片断长度

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #4 yychen 的帖子

谢谢您的回答。还想请教一下，我把转化前后的质粒跑电泳比较了一下，发现位置不一样，这是怎么回事？

yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

质粒状态有很多种，超螺旋，线性，开环，在电泳中行为会有所不同
新鲜提出来的质粒超螺旋状态会占多数，电泳时候跑得会比相同碱基数目的线性片断快，比如说marker通常就是线性片断。
而长期储存的质粒慢慢会解旋，甚至断裂，就会跑得比较慢。
当然，质粒的状态也跟你的提取手法和储存有关
也有可能你转化前的质粒保存良好，都是超螺旋，跑得比较快
转化以后再提取不是很熟练，或者kit有点问题，超螺旋很少，就看起来跑得慢
所以对质粒跑电泳是看不出分子量的，一定要单酶切或者双酶切。

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我今天同时对转化前后的质粒进行了单酶切，经过转化提取的质粒分子量偏小，大约3000bp，质粒分子量应是4700bp，这是什么原因呢？

yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

那就有可能是没有转化成功咯
你可以去测个序看看
反正如果不是正确的质粒，测序会测不出来，不会收钱的

zwsyrt[使用道具]
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