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标题:[讨论帖]MTT实验设计与结果的统计分析

KGZ564[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[讨论帖]MTT实验设计与结果的统计分析




MTT实验结果分析，遇到点问题，请教大家。
1）我做了两株细胞：某肿瘤耐药细胞A/p及其亲本细胞A；
细胞接种至96孔板后加不同浓度的药物m，作用24小时或48小时后加MTT检测，560nm测吸光度，最后算出细胞增殖的抑制率（百分比表示，并作了个曲线图），实验设计了5个复孔，重复3次。
现在进行统计分析，是以5个复孔的平均吸光度值还是以这吸光度而算出来的抑制率百分比来进行统计分析。
如果以前者进行统计分析，假设结果有显著差异，可否在抑制率的百分比的曲线图上标出呢？

2）仍然是上述两株细胞。为了研究药物m对细胞A/p和细胞A的作用，在MTT检测时，有以下几种情况;

1、A/p细胞+含药物p的培养基+不同浓度药物m；
2、A/p细胞+不含药物p的培养基+不同浓度药物m；
3、A细胞+不含药物p的培养基+不同浓度药物m

以上分组是否合理？1组和3组之间MTT结果的差异能够说明什么问题呢? 如何解释这个差异。

谢谢大家，恳请大家帮忙。
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大尾巴[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 KGZ564 于 2012-5-2 13:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')



MTT实验结果分析，遇到点问题，请教大家。
1）我做了两株细胞：某肿瘤耐药细胞A/p及其亲本细胞A；
细胞接种至96孔板后加不同浓度的药物m，作用24小时或48小时后加MTT检测，560nm测吸光度，最后算出细胞增殖的抑制率（百分比表示，并作 ...

你的药物是两种？
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 大尾巴 的帖子

是的，p药物是常用的抗肿瘤药物，细胞A/p是耐药细胞，为了维持细胞
A/p对药物p的耐药性，培养过程中在培养基中加入一定浓度的药物p。
m药物是我们自己萃取的一种药物，主要是想看看m药物对肿瘤细胞耐药性是否有作用。目前的MTT结果显示药物m可以抑制细胞A/p以及细胞A的增殖。
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发表于 2012-5-2 13:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你不加药的对照组设了吗？“m药物对肿瘤细胞耐药性是否有作用”为什么加P药物？我现在也在做两钟药物对细胞的MTT。
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yes4[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

而且我觉的细胞对P药物耐药，对M药物是否耐药还不清。所以我觉得你的分组是有问题的
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zzzz[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用的A/P细胞是否是多药耐药细胞株？因为我看其中涉及到培养基中加入药物P以维持A/P细胞的耐药性。
LZ的问题，我的第一印象是针对一个抗肿瘤化合物，分别用常规的多药耐药细胞和亲本细胞进行体外药效学比较，来考察化合物是否具有抗多药耐药作用，即该化合物的抗肿瘤效果是否受多药耐药机制的影响而降低。不知道我理解的对不对？

第一个问题，我觉得应该按照5个吸光度复孔的平均吸光度计算出来抑制率为准，用重复三次分别的抑制率以至于IC50做统计学差异的分析；
第二个问题，我觉得你的分组确实不大合理。如果你的实验是多药耐药细胞株，一般没有必要去设第1组。一般都是平时用P维持A/P细胞对药物P的耐药性，实验前二周（至少一周）撤药物P，然后拉药物M的浓度梯度，然后比较亲本和耐药细胞的抑制率或者IC50，也就是你的第2组和第3组;不管是否涉及到多药耐药，同时引入P和M，就可能涉及到药物相互作用等未知因素，不仅不能帮你说明问题，而且可能引来更大的不确定性。

个人意见，仅供参考，希望对你有帮助。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1,你以5个复孔的平均吸光度值或以这吸光度而算出来的抑制率百分比来进行统计分析，意义是不一样的，但都粗略表达细胞生长（活性细胞的数量）情况。不同之处在于：直接以5个复孔的平均吸光度值做的统计分析没有经过对照组校正，不同的96孔板对MTT影响结果都不一样；抑制率百分比是通过跟对照组比较得出的抑制程度（从公式可见）。

2，因1，3组之间有2个不同因素，比较起来就很困难，讨论起来的话不是很有说服力。
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发表于 2012-5-2 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为你应该吧耐药株的培养基药物撤掉，因为那样分组相当于是两药合用。短时间的撤药不会引起细胞抗性的丢失。
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

******
1、A/p细胞+含药物p的培养基+不同浓度药物m；
2、A/p细胞+不含药物p的培养基+不同浓度药物m；
3、A细胞+不含药物p的培养基+不同浓度药物m

以上分组是否合理？1组和3组之间MTT结果的差异能够说明什么问题呢? 如何解释这个差异。
********
我的建议：针对1和3 的情况，可以加一个组4即：A细胞+含药物p的培养基+不同浓度药物m；分析起来就会有目的性了；
我们往往在设计实验时忽略了最为基本的对照情况，不要以为新加一组很平常，好像没有多大用处，但却是分析的一个要点。
只是个人的一点建议。
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star#room[使用道具]
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发表于 2012-5-2 13:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
药物的溶剂也需要设置一个对照组，以辨别是药物溶剂对细胞的影响还是药物本身对细胞的影响。
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