[求助]用ＬＰＳ刺激ＲＡＷ２６４．７做炎症细胞模型

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标题:[求助]用ＬＰＳ刺激ＲＡＷ２６４．７做炎症细胞模型

milkdog[使用道具]
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发表于 2012-5-2 14:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问有谁ＲＡＷ２６４．７做炎症细胞模型过？给点意见啊．
　我用的ＬＰＳ　是ＳＩＧＭＡ的，０５５：Ｂ５，１为微克每毫升刺激细胞，但是一直测不到一氧化氮．不知道是细胞的问题还是药物啊．请大家给点意见啊，现在好急啊，做不出来下面的实验都没有办法做啦

hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2012-5-2 14:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你用的是硝酸还原酶法么?
1.药物的浓度,会不会太低?你可以做个梯度.
一般来说,sigma的东西还是相当好的,
2.LPS的刺激时间?也可以做个梯度
3. 细胞株在传代过程中状态会越来越不稳定,我做细胞收缩本来是用人的细胞株的,但是细胞株产生的收缩力不及原代细胞大,检测的方法又不够灵敏,所以只好分大鼠细胞做.你可以用分出来的巨筮细胞做个对照,就知道是不是细胞的问题.LPS刺激巨筮细胞肯定可以产生NO的

还有你检测NO过程中是否存在问题都要好好分析

baidukk[使用道具]
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发表于 2012-5-2 14:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是说用原代培养的细胞吗？我有做过浓度梯度和时间梯度，但是好象不会出来

milkdog[使用道具]
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发表于 2012-5-2 14:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

RAW 264.7 mouse macrophage cells were cultured in DMEM supplemented with 10% FBS, penicillin (100 U/mL), and streptomycin (100 lg/mL) and held at 378C with 7.5% carbon dioxide in a 96-well flat-bottom tissue culture plate for 12 h. Cells were then treated with LPS (1 lg/mL) alone (positive control) or LPS with various concentrations
of X for 18 h. The cell supernatants were collected at the end of the culture for nitrite, which were used as a measure of NO production [25]. Equal volumes of Griess reagent (100 lL; Sigma-Aldrich) were added to each cell supernatant (100 lL), and the absorbance was measured at 570 nm. The concentration of nitrite (lM) was calculated from a standard curve drawn with a known concentration of sodium nitrite dissolved in DMEM. The results are presented as the mean l SD of 4 replicates of one representative experiment and this experiment has been repeated three times with similar results.

这是我看的一篇文章，希望有用！

wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-5-2 14:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以将细胞用血清饥饿疗法作用后，使其同步化，这样细胞状态一致，再用不同剂量的ＬＰＳ（一般浓度相差１０倍）作用于一定数量细胞，设３－５个剂量组，再检测NO，应该会出结果的。祝你好运。

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-5-2 14:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用ＲＡＷ２６４．７做炎症细胞模型, 检测的是MAPK信号通路的活化情况,
其中lps的浓度是500ng/ml,作用时间30或60min.至于检测一氧化氮,我没作过,但估计作用时间不会太长.

BUK[使用道具]
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