小中大
1 取健康6-周的BALB/C小鼠，拉颈处死，浸入70%乙醇中5min；
2 无菌手术取出股骨和胫骨，尽量刮除肌肉组织，
3 PBS洗2次，将其转移到装有RPMI1640的dish中；
4 剪去股骨两端【不要剪去骨端，因为大量的红骨髓都集中在骨端，而骨干部分的骨髓只是无功能的黄骨髓】，用5 ml无菌注射器抽取PBS 2 ml【还是直接用无血清的1640营养更好，更有利于细胞】，将其针头分别从两端插入骨髓腔，反复冲洗出骨髓，直至骨变白，将骨髓收入10ml离心管中；
5 按1：5加红细胞裂解液，室温放置5min【最多1～2min就够了】，
6 1200rpm，离心，5min，共洗2次；
7 记数，用RPMI1640调整细胞浓度为1×106/ml，置于于6孔培养板内，每孔2 ml；
8 37℃、5% CO2 、饱和湿度下贴壁2-3h【千万不要在无细胞因子的情况下贴壁2～3小时，更不要在48小时内就去悬浮细胞，否则你永远不会养一个DC】；
9 吸弃上清，每孔加入2ml含rmGM-CSF（20ng/ml）【如果是R&D的细胞因子10ng/ml足够了，如果是peprotech可能50ng/ml也养不出来，我这里有一些rmGM-CSF，保证10ng/ml就能养出很好的小鼠DC，如有需要请和我联系，我的通讯方式见你的短信】、rmIL-4（20ng/ml）和10% FBS的RPMI1640完全培养液继续培养
10. 隔天半量换液。
