细胞世界

你一个96孔板的孔中种多少细胞？我是指CONA刺激之后的。我觉得你的读值恐怕是结果的真实反应，你的96孔板中恐怕没多少活的细胞，另外，我不是非常明白为什么要用CONA来刺激淋巴细胞，CONA是一个非特异性的刺激剂，对所有的淋巴细胞都有刺激作用，我以前做实验的时候用CONA刺激小鼠的淋巴细胞72小时后，淋巴细胞没多少活的存在。我觉得试验流程应该是这样的
1 取小鼠淋巴细胞，计数
2 将小鼠淋巴细胞种入96孔板中（具体数目应该由你的预试验来确定）
3 加入待测药物，培养基（阴性对照），CONA（阳性对照），以及无细胞单培养基的本地组（或者加入待测药物，如待测药物对结果影响大），37度培养48小时
4 加入CCK8进行测定

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我想请教一下楼上的，给药组：是ConA和药物一起加，还是只加药物的？
我也在做脾淋巴细胞MTT
我的实验设计是这样的，请指教
1 取小鼠脾淋巴细胞，计数
2 种96孔板
3 加药：(1)加细胞，不加ConA，不加药;（2）加细胞，不加ConA，加不同浓度药物；(3)加细胞，加ConA，不加药；（4）加细胞，加ConA，加不同浓度药物
4 培养24小时后MTT检测

我不知道你为什么要加入CONA，一般来说CONA是作为阳性对照存在，当然有可能CONA对于你的试验有帮助并已被文献报道，那这种情况下你就要考虑的是你的对照的问题了。从你上面的试验设计来看，对照设计的不错，但还得加上其他的阴性对照。另外，你确定你的药物能作用24小时后引起淋巴细胞增殖并效果显著？一般来说，药物不可能有这么强的刺激效果，CONA、PHA等非特异性刺激剂除外，如果有这么强的刺激效果那这药就是毒药了。

谢谢指导~~~~~
但是我还是有些不明白的地方：
1，我是要做免疫增强剂的，已有文献表明，ConA是非特异性刺激剂，在脾淋巴细胞中加入我的药物和ConA，如果脾淋巴细胞增殖>只加入ConA刺激的结果。我想是不是可以证明我的药物有免疫增强的作用呢。
2，我还想问一下，如果选择ConA作为阳性对照，ConA+药物作为实验，只有药物作为阴性对照，这样对不对呢？
再次由衷的感谢你 的不吝赐教！