小中大分子生物学常用贮存液的配制
分子生物学常用贮存液的配制
1.30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】将 29g 丙烯酰胺和 1g N，N’- 亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 60ml 的水中。加热至 37℃溶解之，补加水至终体积为 100ml。用滤器(0.45μm 孔径) 过滤除菌，查证该溶液的 pH 值应不大于 7.0，置棕色瓶中保存于室温。
【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。 称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但 也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。 一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存 液中加入大约 0.2 体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt)，搅拌过夜，然后 用 Whatman 1 号滤纸过滤以纯化之。 在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2.40%丙烯酰胺
【配制方法】把 380g 丙烯酰胺(DNA 测序级)和 20g N，N’- 亚甲双丙烯酰胺溶
于总体积为 600ml 的蒸馏水中。继续按上述配制 30%丙烯酰胺溶液的方法处理， 但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为 1L。
【注意】见上述配制 30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列测定 。
3.放线菌素 D 溶液
【配制方法】把 20mg 放线菌素 D 溶解于 4ml 100%乙醇中，1: 10 稀释贮存液， 用 100%乙醇作空白对照读取 OD440 值。放线菌素 D(分子量为 1255)纯品在水 溶液中的摩尔消化系数为 21，900，故而 1mg/ml 的放线菌素 D 溶液在 440nm 处 的吸光值为 0.182，放线菌素 D 的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20 ℃。
【注意】放线菌素 D 是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内 操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。 药厂提供的作治疗用途的放线菌素 D 制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测
量贮存液在 440nm 波长处的光吸收确定放线菌素 D 的浓度，这类制品便可用于
抑制自身引导作用。
4.0.1mol/L 腺苷三磷酸(ATP )溶液
【配制方法】在 0.8ml 水中溶解 60mg ATP, 用 0.1mol/L NaOH 调至 pH 值至 7.0， 用蒸馏水定容 1ml，分装成小份保存于-70℃
5.10mol/L 乙酸酰溶液
【配制方法】把 770g 乙酸酰溶解于 800ml 水中，加水定容至 1L 后过滤除菌。
6.10%过硫酸铵溶液
【配制方法】把 1g 过硫酸铵溶解于终量为 10ml 的水溶液中，该溶液可在 4℃保 存数周。
7.BCIP 溶液
【配制方法】把 0.5g 的 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP )溶解于 10ml 100%
的二甲基甲酰胺中，保存于 4℃
8.2×BES 缓冲盐溶液
【配制方法】用总体积 90ml 的蒸馏水溶解 1.07g 盐溶液 BES[N ，N-双(2-羟乙 基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl 和 0.027g Na2HPO4 ，室温下用 HCl 调节该溶液的 pH 值至 6.96、然后加入蒸馏水定容至 100ml，用 0.22μm 滤器过滤除菌，分装成 小份，保存于-20℃。
9.1mol/L CaCl 2 溶液
【配制方法】在 200ml 蒸馏水中溶解 54g CaCl2 •6H2O，用 0.22μm 滤器过滤除菌，
分装成 10ml 小份贮存于-20℃。
【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至 100ml，用 Nalgene
滤器(0.45μm 孔径)过滤除菌，然后骤冷至 0℃。
10.2.5mol/L CaCl 2 溶液
【配制方法】在 20ml 蒸馏水中溶解 13.5g CaCl2•6H2 O，用 0.22μm 滤器过滤除菌 ，
分装成 1ml 小份贮存于-20℃。
11.1mol/L 二硫苏糖醇(DTT)溶液
【配制方法】用 20ml 0.01mol/L 乙酸钠溶液(pH5.2 )溶解 3.09g DTT，过滤除 菌后分装成 1ml 小份贮存于-20℃。
【注意】DTT 或含有 DTT 的溶液不能进行高压处理。
13.0.5mol/l EDTA( pH8.0)溶液
【配制方法】在800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠(EDT A-Na•2H2O)， 在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用 NaOH 调节溶液的 pH 值至 8.0(约需 20g NaOH 颗粒)然后定容至 1L，分装后高压灭菌备用。
【注意】EDT A 二钠盐需加入 NaOH 将溶液的 pH 值调至接近 8.0,才能完全溶解。
14.溴化乙锭(10mg/ml 溶液)
【配制方法】在 100ml 水中加入 1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶 解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时 务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。
15.2×HEP ES 缓冲盐溶液
【配制方法】用总量为 90ml 的蒸馏水溶解 1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g
Na2PO4•2H2O、0.2g 葡聚糖和 1gHEPES ，用 0.5mol/l NaOH 调节 pH 值至 7.05， 再用蒸馏水定容至 100ml。用 0.22μm 滤器过滤除菌，分装成 5ml 小份，贮存于-
20℃。
16.IPTG 溶液
【配制方法】IPTG 为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为 238.3)，在 8ml 蒸 馏水中溶解 2g IPTG 后，用蒸馏水定容至 10ml，用 0.22μm 滤器过滤除菌，分装 成 1ml 小份贮存于-20℃。
17.1mol/L 乙酸镁溶液
【配制方法】在 800ml 水中溶解 214.46g 四水乙酸镁，用水定容至 1L 过滤除菌。
18.1mol/L MgCl2 溶液
【配制方法】在 800ml 水中溶解 203.4g MgCl2•6H2O，用水定容至 1L，分装成小 份并高压灭菌备用。
【注意】MgCl2 极易潮解，应选购小瓶(如 100g)试剂，启用新瓶后勿长期存放 。
19.β- 巯基乙醇(BME)溶液
【配制方法】一般得到的是 14.4mol/L 溶液，应装在棕色瓶中保存于 4℃。
【注意】BME 或含有 BME 的溶液不能高压处理。
20.NBT 溶液
【配制方法】把 0.5g 氯化氮蓝四唑溶解于 10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于
4℃。
21.酚/ 氯仿溶液
【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用 0.1mol/L Tris •HCl(pH7.6)抽提几次以平 衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的 0.01mol/l Tris •HCl(pH=7.6)液层, 保存于 4℃。
【注意】酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护
服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清 洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
22.10mmol /L 苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液
【配制方法】用异丙醇溶解 PMSF 成 1.74mg/ml(10mmol/L)，分装成小份贮存 于-20℃。如有必要可配成浓度高达 17.4mg/ml 的贮存液(100mmol/L)。
【注意】PMSF 严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收
后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了 PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被
PMSF 污染的衣物应予丢弃。
PMSF 在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。
PMSF 在水溶液中的活性丧失速率随 pH 值的升高而加快，且 25℃的失活速率高 于 4℃。pH 值为 8.0 时,20μmmol/l PMSF 水溶液的半寿期大约为 85min，这表明 将 PMSF 溶液调节为碱性(pH>8.6 )并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。
