小中大[求助]腺病毒
我以前用AD293包装病毒,病毒是有了,但滴度太低,一直怀疑是是细胞传代太久,包装效率不高,后来我们老板搞来了一支代数较早的HEK293,可是在转染质粒时两天就出现了CPE,而且培养基变得轻度浑浊,里面有很多小颗粒,但是细胞并没有死,不知是不是污染?我们实验室条件有限,还不好拍照片。请各位高手帮帮忙,很急!
我检查过使用的培养基和试剂(单独培养了各种试剂),都没问题。不知是什么原因。我主要想了解以下问题:
1、病毒滴度不高的原因,解决办法?
2、转然后两天出现病变,是不是太快了?
3、我的细胞是不是污染了?还是细胞碎片之类的?(两次出现这种情况了)
4、收毒的时机和方法。
我的实验步骤:
1、提质粒(QIAGEN MINIprep KIT)
2、酶切,胶回收(QIAGEN MINI KIT)
3、8ug质粒,15ulLP2000转染60mmDish,之后换2%FBS的DMEM培养
4、有病变后(大于80%),反复动容三次,取上清接毒(直接加到2%FBS的培养基里,给细胞换液)
请各位高手帮忙指点,不胜感激。