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标题:[求助]贴壁的细胞如何进行病毒感染

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发表于 2012-5-2 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]贴壁的细胞如何进行病毒感染




我养的人的卵巢颗粒细胞，算是贴壁的大细胞，需要用HBV病毒进行感染试验，进行了几次都没有成功，我的实验方法是HBV病人的阳性血清加聚乙二醇共孵育12小时后，用二甲基亚酚12小时，不知各位养过细胞，进行过病毒感染实验的高手给与指点，谢谢
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发表于 2012-5-2 17:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教下聚乙二醇和二甲基亚酚都是干什么用的？不会对病毒活性有影响吧？
我只接触过容易传代培养的病毒，标本直接接触单层细胞即可，所以没有这些处理。不太懂。
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 小中大

那两个都是促进病毒与细胞融合的，应该对病毒没有什么影响，我看见有人用于HBV病毒感染肝细胞的时候也有用过的。不知道你有没有感染过HBV病毒，这个病毒需要什么样的条件，我发现我养的贴壁的卵巢颗粒细胞比较大，而且不太容易染色，是不是这样的细胞比较难被感染，我用苏木素染色5分钟都不太有颜色的
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发表于 2012-5-2 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
根据我的了解，HBV病毒的衣壳蛋白决定宿主细胞，比如肝细胞，要用一个常用的细胞系来验证
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 小中大
是的，HBV感染细胞是取决于细胞表面有没有S1区的受体，但是有人实验指出，颗粒细胞表面存在膜联蛋白受体，我就是想看一下，颗粒细胞能否被HBV感染成功，我的感染条件需要进行怎么样的摸索？有前辈可以指点一下否？
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viviwang1987[使用道具]
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 小中大
弃去培养液，用缓冲溶液清洗细胞表面2至3次控干水份。加入病毒稀释液35度左右进行病毒吸附，吸附过程结束以后加入细胞维持液完成。
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newway[使用道具]
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发表于 2012-5-2 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
病毒稀释液是什么，我的HBV只能从病人的阳性血清中获得，是将血清稀释吗？怎么稀释，我所取得病人的病毒定量约7次方左右？细胞维持液又是什么？
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发表于 2012-5-2 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞维持液是什么？
你这个问题问的有点不对吧？你还养细胞哪
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-5-2 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞维持液应该就是细胞培养液，病毒稀释液我用的是没有血清的培养液。
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yhz1973[使用道具]
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 小中大

我做过贴壁细胞的病毒转染 不过病毒是请公司包装的 楼主首先要确认 你的病毒滴度是否准确！
转染步骤如下：
首先在你的细胞长到合适的时候 换液
吸尽培养基 把病毒用少量新培养基稀释后 （稀释到适合的浓度，以实验方案为准）均匀滴在细胞上 以刚好盖满培养皿底部为佳

轻轻摇晃 使其均匀分布 37度 5% co2 常规培养箱 放置30--60分钟

补足培养基即可
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