小中大我要分离人外周血单个核细胞用于树突状细胞培养，但按照梯度密度离心的步骤，我在15ml的离心管里加入4ml的分离液，再慢慢加入pbs1：1稀释的血液8ml，加入后界面还是清晰的，但隔了2min后稀释的血液就往下沉了，界面不是很清晰了，这样会影响分离的效果吗，毕竟想分离了几管再一起离心的，还有就是每次分离的含有不少的红细胞，有什么办法能减少红细胞呢，我分离出来的细胞还有用于培养，用红细胞裂解液会不会影响培养效果呢？
15ml及50ml离心管一次能分离稀释的血液多少ml呢？
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提几点建议：
1、用PBS稀释时，一定要混匀
2、重悬到Ficoll上后应立即离心，离心结束后应立即将白膜吸出。重悬后放的时间一长，红细胞就会往下沉，虽然对分离效果影响不是很大，但最好避免
3、离心减速时，使用慢减速
4、如果分离的细胞用于培养，不要使用红细胞裂解液。因为一般的红细胞裂解液对细胞有类似固定的作用，不适合培养
5、如果血液比较多的话，可以先离心，将白膜浓缩后在用Ficoll分离，这样可以减少Ficoll的用量
