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我来说一下我的看法哈
并不是细胞长得不好就一定是污染，（当然先排除明显污染的可能性，你可以先搜搜讲不同污染的帖子学习一下）
按理说，正规的无菌操作，正规的超净台和环境，再加上正规的液体（即使是自己配pbs，培养基什么的，无菌操作，正规消毒过滤什么的，也应该不会污染），如果镜下不是明显的支原体、霉菌或者黑胶虫表现（你也可以继续观察，不排除污染前期的各种表现），我觉得不能忘记考虑些其他因素
1、楼主的“复苏了两管..第二天发现贴别状态比较好，大概有百分之八十吧，上面飘着一些死细胞，...2天后传代，细胞贴壁后，其中从一瓶传出的细胞上面还是飘着死细胞，而另一瓶传出的细胞死细胞就很少，...”
a 得考虑这两个冻存管的细胞活力的问题，毕竟这两管在冻存阶段的时候可能就有差异了，再说只要复苏细胞有一瓶长得好就行了，好好养，慢慢传，再用这部分细胞去做后续试验就是了，（总比我看见的朋友复苏n瓶都长不好，要乐观多了吧）
b 传代后死细胞多还要考虑你吹打是否均匀与你的细胞的生长快慢的综合影响，试想你吹打不均，细胞又长的快，聚集了一大批细胞的地方细胞增殖空间就比其他匀净的地方相对要小，细胞的营养（打了半天yunyang是说咋打不出来呢，呵呵）和代谢废物的堆积以及局部细胞过密产生的相互抑制都会造成细胞死亡的
如果是这样，当然“以后每次换液都是那部分细胞总有死的，而另外的就很少有死细胞。”是没法解决的啊，
只能离心后吹成悬液，重新再铺匀净些
c所谓的胰酶消化过度，这也是考虑的一方面，也就是消化时间太长，对细胞产生了损伤，影响了细胞的活力
2、至于2楼的“我养的细胞也是脏兮兮的，有一些长条状黑丝，飘着死细胞，贴壁状态不太好，但是仍然正常生长，且接入96孔板全部贴壁且很干净。起初怀疑是胰酶消化过度或者支原体污染，降低胰酶消化时间后，情况改善一点，但仍然有细胞漂浮。”
a 养某些细胞本来镜下看起来就很脏的样子，这个你可以去图片那个子板看看你细胞是不是本来看起来就脏（毕竟你“接入96孔板全部贴壁且很干净”所以这方面可能性较小）
b 接上，考虑2楼你的培养瓶是不是没有洗干净，或者操作中或孵育时的污染，你也可以根据你看见的长条状黑丝的具体形态，是否卷曲、成簇、折叠等等去判断（你可以去搜搜，具体讲污染的帖子很多）
请问 被支原体污染后 是什么样子的 谢谢
