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标题:[求助]请大家帮我看看LPS刺激THP-1测IL-8出现的问题

skytree[使用道具]
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发表于 2012-5-7 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请大家帮我看看LPS刺激THP-1测IL-8出现的问题




LPS刺激THP-1测IL-8，阴性对照组的IL-8总是高（200PG/ML)，把玻璃器皿干烤过后，阴性对照值反而更高了(900PG/ML)，请大家帮我诊断一下，哪里出了问题。在下先谢谢！
1。细胞有问题？
2 培养基被LPS污染？
3 操作问题？
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kulee[使用道具]
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发表于 2012-5-7 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

May be you can focous on the KIT used to diagnose IL-8.

What about the positive?
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发表于 2012-5-7 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我把THP-1 用PMA诱导成巨噬细胞，LPS刺激后，阴性对照组仍然高，20ng/ml,
LPS刺激组与阴性对照没有差别。
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发表于 2012-5-7 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

也许不是阴性对照的问题，而是LPS的刺激效果不好。20ng/ml不高的。可能需要摸索LPS的刺激浓度与时间。
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skytree[使用道具]
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发表于 2012-5-7 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

lps我摸了0.1ug/ml和10ng/ml两个浓度，刺激时间24小时，都没有效。是不是LPS本身的问题，我的型号是L2630，还是THP-1代数多了，对刺激不敏感了，还是晶美ELISA试剂盒问题？我的玻璃容器如吸管、吹打管和培养瓶都经过250度干烤以除内毒素，这样对结果有影响吗？
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2012-5-7 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

20ng/ml 已然是很高的啦，一般都是几千pg/ml（细胞浓度有关）
晶美的kit嘛，也是可以用的，就是响应值低些
PMA本身不是刺激源么？
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qhyu[使用道具]
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发表于 2012-5-7 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我把THP-1 用PMA诱导成巨噬细胞，LPS刺激后，阴性对照组仍然高，20ng/ml,
LPS刺激组与阴性对照没有差别。

——————————————————————————————————————————————————————

我也在做PMA诱导后LPS刺激测IL-6和TNF，LPS刺激组与阴性对照没有差别，甚至更高。不知什么原因？急啊！
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qhyu[使用道具]
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发表于 2012-5-7 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
20ng/ml 已然是很高的啦，一般都是几千pg/ml（细胞浓度有关）
晶美的kit嘛，也是可以用的，就是响应值低些
PMA本身不是刺激源么？

——————————————————————————————————

我也在想，是否PMA本身刺激就引起细胞因子分泌增多？如何去除呢？
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发表于 2012-5-7 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在做THP-1的试验，和大家一样也遇到了类似的问题，楼上的lukeli说的很对，PMA本身就是很强的刺激源，他能够引起很多基因的表达，对细胞的影响很大，大家说的阴性对照组应该是PMA完刺激完后的巨噬细胞吧，阳性对照组是LPS再刺激的。我想正确的应该是PMA刺激结束后，PBS或培养基洗2-3次，再使用无血清培养基培养12个小时左右，再加LPS,这样效果可能要好些。我也正在做这一步，不知大家还有啥好方法？？？
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-5-7 12:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

LPS本身就可以刺激单核细胞成巨噬细胞分泌细胞因子,
难道不能直接使用LPS刺激THP-1细胞,而一定要先用PMA刺激成
巨噬细胞才能实验吗?因为我也是准备做这方面的实验,所以希望
能向各位前辈请教一下.
我看到楼上写道"我想正确的应该是PMA刺激结束后，PBS或培养基洗2-3次，再使用无血清培养基培养12个小时左右，再加LPS,这样效果可能要好些。"
我想问一下结果怎么样,这样可以吗?谢谢
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