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1、首先你要确定你的是不是黑胶虫
2、黑胶虫的特点
(1) 与细胞共生,细胞长的好或密度大的话,小黑点就少,反之则 多;
(2) 对抗生素无效;
(3) 可能通过培养箱空气进行污染;
(4) 单用培养液及血清培养没发现问题。
(5) 换掖冲洗后也无效。
以及
(6)形态上有些像细菌,直径约在0.5~1微米,
(7) 在400X倒置显微镜下,有典型的布朗运动(不规则的原地小距离抖动)。
(8) 细胞内好像也有存在,
(9) 但并不引起培养液混浊
(10) 时间稍长,细胞状态明显恶化,并最后死亡
3、目前常用的处理:
1).有人建议说,换好一点的血清(其实这样的原理就是让细胞长的好些,从而在一定程度上抑制黑胶虫)。
2).如果是贴壁细胞的话,可用无菌的PBS洗几次,可一定程度上缓解。
若是悬浮的话,就不太好处理拉,可以向其中少加一点滋养细胞(从小鼠腹腔内取的巨噬细胞,这种细胞不分裂,过一阵就死掉了,做抗体杂交瘤融合的同志肯定知道)。
加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效!还有就是实验环境要注意好,保持细胞间整个环境的洁净度。
3).换用进口的一次性塑料培养瓶(也就是处理好培养瓶方面的问题)。
4).建议清理无菌室所有物品,重新灭菌,用KMnO4熏蒸,
按首次使用无菌室做,细胞重新复苏。(估计这句是楼主主要想问的)
5). 在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打,冲洗干净后再加入培养液,坚持天天洗,传代时加生理盐水再离心一次,接种密度稍大一些,一段时间后,虫子就会大大减少,对细胞的生长也不会有大的影响。