小中大hcworld.com里面有比较复杂的配方，我用过，效果很好。
Normal Goat Serum Blocking Solution:
2% goat serum (blocking)
1%BSA (stabilizer)
0.1% cold fish skin gelatin (blocking)
0.1% Triton X-100 (penetration enhancer)
0.05% Tween 20 (detergent and surface tension reducer)
0.05% sodium azide (preservative)
0.01M PBS, pH 7.2
Mix well and store at 4 ºC.
通常我配500ml的不含血清的封闭液，高温灭菌之后4度保存。用的时候，临时加入相应浓度的血清。我的原则是如果你的二抗是羊抗兔，封闭液里就要加羊血清，如果是驴抗兔，封闭液里就要加驴血清。
封闭时间30min, 室温。一抗，二抗都用封闭液来稀释。你可以试着换换。洗的时候，我用的是PBST( 0.02% Tween 20).
关于对照的问题，我认为你应该用isotype control 而不是用 省略一抗来做对照。
