[求助]流式细胞图分析

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标题:[求助]流式细胞图分析

qqq111[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我采用AnnexinV-PI双染测定细胞凋亡，是这样的，不知道行不行？下面的图是对照组的。
急急急！

附件

2012-5-7 16:09

64407072.snap.jpg (23 KB)

ha111[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

设门后，看分布，右上是死细胞A-P+，右下是凋亡细胞A+P-，左下是活细胞A+P-

mamamiya[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

凋亡细胞用Annexin V和PI染色以后的分区，需要根据对照管来设置。不知道你的实验中有没有实验前的活细胞，如果有的话，就用活细胞染色，然后设置十字门，用画的十字线压住活细胞群的边缘，这样对比以后，哪些细胞发生了凋亡就一目了然。如果没有活细胞群，你可以就实验的细胞做两个单染色的管，一个单染PI，来确定竖线位置，一个单染Annexin V来确定横线位置。如果不设置对照管的话，你分区的时候，十字线左右动一动都会偏差很大。我看了你的图，十字线在X轴上都画到了10的2次方的位置，有点太偏右了。

ha111[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个图最大的错误就是FL2的电压不够，会影响到你的实验数据，rmjy1981 说得10的2次方的位置，有点太偏右了，是的，为了图的美观，就你这幅图而言，FL2的电压应该加大，FL1减小，当然如果只是单纯的十字线靠右，因为要根据细胞分群而划线，你的数据是不会有影响的

qqq111[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问根据我现在的这个图，得出的凋亡比例数据是否可靠呢？

kuaizige[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问根据我现在的这个图，得出的凋亡比例数据是否可靠呢？

————————————————————————————————————————————————————————————

你没搞明白啊～就你这一幅图根本没法得出你凋亡的结论。给你个图看看吧，上面一个是活细胞对照，下面一个是染色后的凋亡/坏死。

附件

2012-5-7 16:12

69980945.snap.jpg (46.57 KB)

qqq111[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #6 kuaizige 的帖子

那怎样才能从我的图上得到凋亡数据呢？请告诉我。是不是移动十字线啊？

qqq111[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问各位行家，如何设置活细胞区在十字象限中的位置。从我的图上看，图像的下部应该有很多还没有显示出来，所以应该怎样将图像往上移动呢？

qqq111[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问各位：根据上面提供的流式图，是不是如果我将FL2的电压加大，FL1的电压减小，就会使得到的图像往上移动，并且同时往左边移动呢？
另外，为什么我的图像中，细胞分区聚集的现象不明显呢？好像正常的，凋亡的，死亡的细胞分界十分模糊，这应该怎么解决呢？

xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

电压不是随便加减的,十字架也不能随便移动.
电压和项限位置是根据对照来调节的,每次上机检测都要做4个对照,一个是空白细胞,不加FITC和PI,一个是单染FITC,一个是单染PI,然后再一个是要双染的,这样能便于调节参数和画门.

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