[求助]TGFbeta1为什么会导致肝星状细胞LX-2聚集？

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标题:[求助]TGFbeta1为什么会导致肝星状细胞LX-2聚集？

fox_79[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我刚刚养这个LX-2细胞两个月，细胞养起来还凑乎，长的也挺快。问题是，我一用TGFbeta1诱导，它就聚集到一起，这是正常现象吗？还是细胞有什么问题？
具体过程是：平常培养的时候我用2％FBS和10％FBS的DMEM都试过，对结果没有影响。TGFbeta1（2ng/ml)处理（24h或48h）的时候，我用无血清的DMEM或者1％FBS的DMEM时，LX-2会聚集;但是2在％FBS的DMEM中处理时，细胞看上去很正常。
做了很多遍了，都这样，有哪位大牛能帮忙解惑? 十分感谢。（聚集的图见后）

附件

2012-5-7 16:24

99223864.snap.jpg (30.11 KB)

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是不是血清的问题？另外加了TGF是不是就会这样？
顺便问问这个细胞好不好养，一般作抗纤维化用这个吧？

dog002[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个细胞我培养过，楼主说2％FBS的就养的很好？我不知道楼主用的是什么公司的血清？国产的？有文献报道是3%的血清就能养的很好，但是当时我培养的时候还是用10%来养的，虽然这个细胞株当时是徐列明教授在低血清条件下分离出来的，但是我个人认为真正培养的时候还是用10%的血清稍微好一点。
TGF-β的命名是根据这种细胞因子能使正常的成纤维细胞的表型发生转化，即在表皮生长因子（EGF）同时存在的条件下，改变成纤维细胞巾壁生长特性而获得在琼脂中生长的能力，并失去生长中密度信赖的抑制作用。
但是我个人认为可能还是血清低的缘故，血清低了，生长因子的减少，使得细胞只能通过聚集到一起才能相互依靠自身分泌的细胞因子存活，血清浓度高了，便不存在这个原因了。个人愚见，仅供参考！
祝你成功！

milkdog[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

No problem with 1% FBS-containing DMEM.

fox_79[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢各位的回答，我还以为要沉底了呢。

还在摸索。为什么会是血清的问题？如果是血清的问题，那应该在有血清的时候出问题，而不是在无血清的情况下吧？
主贴说了，在2％血清的情况下，TGF就不会引起这个现象。
细胞还算好养，没发现有什么特别麻烦的地方，就是贴壁不是很紧，传代的时候注意不消化过了就行。
抗纤维化的细胞学实验，我看到的文献，这个LX-2用的有一些，不过也有很多用rat的T6的，还有就是直接从动物分离的HSC。

fox_79[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的意思是？1％血清中TGFβ不会引起聚集 or 1%血清培养就没问题了？

我的初衷是，建立一个TGFβ刺激LX－2的细胞筛选模型，来筛选能够抑制TGFβ通路的药物。如果TGFβ刺激后发生了聚集，而且这种聚集最终会导致细胞死亡，这样就不能够用来筛选了。而我看到的文献当中，似乎是可以这么用的。所以我不知道问题出在了哪里。

而且，据文献报道，血清会刺激细胞中的collagen的分泌（ Serum-stimulated alpha 1 type IV collagen gene transcription is mediated by TGF-beta and inhibited by estradiol。Am J Physiol. 1998 Feb;274(2 Pt 2):F252-8.），而这正好是TGFβ下游的产物，因此在处理过程中加血清似乎不是一个很好的选择，有可能影响到了TGFβ通路。

各位有何建议？

fox_79[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用的是Gibco的血清。我也用10％的血清养来的，确实要长的快一些，也要饱满一些。但2％的确实也足够维持了。看文献中，5％，10％血清的比较多。关键问题是，传代过程中用的血清浓度似乎并不改变TGFβ刺激细胞聚集，这个让我很头疼。
谢谢你的关于TGFβ的说明，我在看文献的时候，似乎并没有看到谁在抗纤维化的研究中，用TGFβ与EGF合用啊。
这么说你认为这种聚集是正常反应了？

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发表于 2012-5-7 16:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Gibco的血清是比较好的，估计2%-3%就可以了。
为什么不考虑转染呢？
只是建议，可以考虑考虑。

fox_79[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

其实这个问题我也想过，只是，TGFβ加入后，就会激活TGFβ自身高表达，似乎就不需要表达那么麻烦了。况且表达之后，会不会有相同的反应？或者细胞产生了一些别的反应？

ending[使用道具]
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发表于 2012-5-7 16:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1％FBS的DMEM时，LX-2会聚集;但是2在％FBS的DMEM中处理时，细胞看上去很正常

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这个现象您碰到了多次？

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