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哎呀,太漂亮了!
背景还如此的干净!
曾几何时,我也曾培养出过这么好的细胞,但不经常,现在更是绝迹了。
我一直不会把照片变小(都是3M多),真想把现在的照片发两张给你看看,请你帮忙分析一下。
我把我的原代过程说给你看看如何?
1. 24小时的wistar仔鼠,浸泡酒精后取出大脑,置于冰上的pbs液里。
2. 剥脑膜(自腹侧向背侧),取海马,再剥净血管和筋膜,置于Hanks液里,剪碎。
3. 弃上清,加胰酶,37度消化10-15分钟,加含血清的DMEM/F12终止。
4. 离心(1000r/min)后,弃上清。加终止液洗一遍,再离心。
5. 加培养液(含血清、B27、双抗的DMEM)吹打,30-40下,经200目筛网过滤。
6. 再离心,弃上清,重悬,计数、接种,密度:1乘10的6次方/毫升。
怎么样,过程有什么问题没有,一直这种方法,但在10月份后,就长不出细胞了,颗粒是黑色的。苦恼啊,反复修正方法、隔天就做,也不成功。
不过,在养出来后,也常常在细胞下层有裙带样的物质,好像分泌的基质样,神经元都长在那上面。你的就非常干净,看着舒服。
请指点一二,多谢多谢了!
学会发照片后,发几张失败的,看看。