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标题:[求助]是神经干细胞吗

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[求助]是神经干细胞吗




我要养的是海马神经细胞,现在培养出来的有人说是神经干细胞。
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根据我的经验楼主这不是神经干细胞,如果还怀疑可以做下干细胞标记抗体nestin染色。楼主可以看下我的神经干细胞就知道了,干细胞一般是成球状生长,而楼主的有明显的突起。你这种情况可能有两种原因造成的:
1. 消化后种的细胞中仍然含组织块
2. 包被没包好,如果没包好的话,有的细胞就会形成球状聚集,就像干细胞球。


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2012-5-7 16:34
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的确,你的这张图片和资料里描述的神经干细胞是符合的。球状生长,没有突起。
不过我最近做的神经细胞,长出来都是这样子。不过有疑问想和你交流:

1.我接种的细胞悬液是经过了200目的筛网,而且,种到瓶里后在显微镜下看了,的确是单个细胞,但是,在3h、4h观察,细胞都聚到了一起,再过几天,就是图片上这个样子了;

2.不知你用什么包被,我用多聚赖氨酸(sigma分装,分子量15000—30000),请问你,包好包不好怎么看呢?包的时候,感觉不到粘,像水一样。我配的是0.01%。你是用的什么呢?

谢谢你!
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我们包被用的也是多聚赖氨酸是0.05%的,37度包被两小时,水洗2次,一定要晾干,然后照下紫外,就可以种细胞了,一般都没有问题的。我们的细胞悬液都没有经过筛网,就涨的挺好的
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是啊,咱们差不多啊,只是我是在4度过夜,洗后用。

那你也是养神经元吗?

我养的细胞,曾出现过细胞外细沙样的颗粒,把神经元胞体都掩埋了,我曾怀疑过是不是PLL脱落下来了,你遇到过这种情况吗?

你的PLL包被时,感觉粘稠吗?

多谢你的相助!
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PLL是不粘稠的
出现的细沙样的颗粒是黑色的吗,是不是因为脑膜没有剥离干净,消化后造成。
发张我的海马原代神经元照片


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哎呀,太漂亮了!

背景还如此的干净!

曾几何时,我也曾培养出过这么好的细胞,但不经常,现在更是绝迹了。

我一直不会把照片变小(都是3M多),真想把现在的照片发两张给你看看,请你帮忙分析一下。

我把我的原代过程说给你看看如何?

1. 24小时的wistar仔鼠,浸泡酒精后取出大脑,置于冰上的pbs液里。

2. 剥脑膜(自腹侧向背侧),取海马,再剥净血管和筋膜,置于Hanks液里,剪碎。

3. 弃上清,加胰酶,37度消化10-15分钟,加含血清的DMEM/F12终止。

4. 离心(1000r/min)后,弃上清。加终止液洗一遍,再离心。

5. 加培养液(含血清、B27、双抗的DMEM)吹打,30-40下,经200目筛网过滤。

6. 再离心,弃上清,重悬,计数、接种,密度:1乘10的6次方/毫升。

怎么样,过程有什么问题没有,一直这种方法,但在10月份后,就长不出细胞了,颗粒是黑色的。苦恼啊,反复修正方法、隔天就做,也不成功。

不过,在养出来后,也常常在细胞下层有裙带样的物质,好像分泌的基质样,神经元都长在那上面。你的就非常干净,看着舒服。

请指点一二,多谢多谢了!

学会发照片后,发几张失败的,看看。
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组织消化前剪组织这一步,剪碎但又不能剪的太碎,要注意
第二,消化过程中我一般消化15Min,中间摇晃几次,但也不要消化太过,仍然能看到组织块,但周边又比较浑浊为好
第三,我一般吹打15-20次,吹打后仍然可见组织块为好,要不就将组织块也吹碎了。吹打之后即静置5分钟左右,然后吸上清
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好的,按你的建议再试一次。

另外,你的培养液是DMEM/F12+胎牛血清+B27+双抗吗?

我用的胎牛血清是四季青的,你用的是进口的吗?还是无血清培养基?

还有你在培养瓶里养,还是在六孔板里养?

太谢谢你了。
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我用的是血清培养,培养液是DMEM+10%胎牛(invitrogen的)
但第二天即半换为DMEM+2%B27(invitrogen的),以后隔一两天半换,看你的细胞生长情况了
我是在六孔板和24孔板都种过,也种过在包被的玻片上过的
如果有什么问题多多交流呵
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